中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2008年
3期
169-173
,共5页
李媛%张建华%王亮%乔祖建%辛九庆
李媛%張建華%王亮%喬祖建%辛九慶
리원%장건화%왕량%교조건%신구경
猪肺炎支原体%猪喘气病%伴侣蛋白DnaK%热休克蛋白70
豬肺炎支原體%豬喘氣病%伴侶蛋白DnaK%熱休剋蛋白70
저폐염지원체%저천기병%반려단백DnaK%열휴극단백70
猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,MaP)是猪气喘病的病原.DnaK又称为热休克蛋白Hsp70,具有分子伴侣和免疫的作用.以MHP中国分离株Yin-1为模板,扩增了DnaK基因的全序列,将该序列克隆到pMD18-T载体上并测序.测序结果Yin-1株DnaK基因即Hsp70基因全长1 803 bp,编码600 aa,第631～633位TGA在支原体编码色氨酸而不是作为终止密码子.将该序列与多种致病支原体DnaK基因进行分析比较,发现Yin-1株与232株、J株、7 448株等MHP菌株的DNA同源性为99.3%～99.4%,氨基酸同源性为99.2%～99.3%,而与非同种支原体的DNA和氨基酸同源性仅为64.5%～74.4%和59.3%～77%.这表明DnaK基因在种内高度保守,种间差异较大.以pET28a为载体构建重组质粒,原核表达DnaK C末端大小为1 kb左右的基因,对表达的蛋白进行纯化后,通过Western blot检测它的免疫活性.原核表达得到大小为41 ku的目的蛋白,经Western blot证实,纯化蛋白可与MHP阳性猪血清反应,具有免疫活性.
豬肺炎支原體(Mycoplasma hyopneumoniae,MaP)是豬氣喘病的病原.DnaK又稱為熱休剋蛋白Hsp70,具有分子伴侶和免疫的作用.以MHP中國分離株Yin-1為模闆,擴增瞭DnaK基因的全序列,將該序列剋隆到pMD18-T載體上併測序.測序結果Yin-1株DnaK基因即Hsp70基因全長1 803 bp,編碼600 aa,第631～633位TGA在支原體編碼色氨痠而不是作為終止密碼子.將該序列與多種緻病支原體DnaK基因進行分析比較,髮現Yin-1株與232株、J株、7 448株等MHP菌株的DNA同源性為99.3%～99.4%,氨基痠同源性為99.2%～99.3%,而與非同種支原體的DNA和氨基痠同源性僅為64.5%～74.4%和59.3%～77%.這錶明DnaK基因在種內高度保守,種間差異較大.以pET28a為載體構建重組質粒,原覈錶達DnaK C末耑大小為1 kb左右的基因,對錶達的蛋白進行純化後,通過Western blot檢測它的免疫活性.原覈錶達得到大小為41 ku的目的蛋白,經Western blot證實,純化蛋白可與MHP暘性豬血清反應,具有免疫活性.
저폐염지원체(Mycoplasma hyopneumoniae,MaP)시저기천병적병원.DnaK우칭위열휴극단백Hsp70,구유분자반려화면역적작용.이MHP중국분리주Yin-1위모판,확증료DnaK기인적전서렬,장해서렬극륭도pMD18-T재체상병측서.측서결과Yin-1주DnaK기인즉Hsp70기인전장1 803 bp,편마600 aa,제631～633위TGA재지원체편마색안산이불시작위종지밀마자.장해서렬여다충치병지원체DnaK기인진행분석비교,발현Yin-1주여232주、J주、7 448주등MHP균주적DNA동원성위99.3%～99.4%,안기산동원성위99.2%～99.3%,이여비동충지원체적DNA화안기산동원성부위64.5%～74.4%화59.3%～77%.저표명DnaK기인재충내고도보수,충간차이교대.이pET28a위재체구건중조질립,원핵표체DnaK C말단대소위1 kb좌우적기인,대표체적단백진행순화후,통과Western blot검측타적면역활성.원핵표체득도대소위41 ku적목적단백,경Western blot증실,순화단백가여MHP양성저혈청반응,구유면역활성.
