生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2009年
2期
244-253
,共10页
孙义民%曾令琴%张岩%魏丽%K R MITCHELSON%张亮%程京
孫義民%曾令琴%張巖%魏麗%K R MITCHELSON%張亮%程京
손의민%증령금%장암%위려%K R MITCHELSON%장량%정경
基因表达调控%转录因子%微阵列芯片%TF-ELISA
基因錶達調控%轉錄因子%微陣列芯片%TF-ELISA
기인표체조공%전록인자%미진렬심편%TF-ELISA
转录因子是一类具有序列特异性的双链DNA结合蛋白.在哺乳动物细胞中, 一个转录因子可以调控多个靶基因,一个基因也同时受到多个转录因子的调控,从而形成复杂的基因表达网络调摔机制.在蛋白质水平检测特定状态下组织或细胞中的转录因予活性对深入研究基因表达调控的分子机制具有重要的意义.针对TRANsFAc数据库提供的226个小鼠转录因子的PSSM,设计了240个转录因子结合探针,构建了可以在蛋白质水平同时检测约200个小鼠转录因子的微阵列芯片,实验结果显示:a.针对含有不同DNA结合结构域的7个转录因子,进行依赖于抗体的转录因子活性检测,结果证明该芯片具有良好的特异性;b.针对NFkB转录因子纯品,芯片的检测灵敏度町以达到0.5 nmol/L,线性范围为O.5～20 nmol/L,表明芯片具有较高的灵敏度和良好的定量能力;c.针对经典的IKK,JNK信号通路和JAK/STAT信号通路,该芯片可以检测剑其关键转录因子的活性变化,证明芯片的可靠性;d.针对小鼠前脂肪细胞系3T3-L1的分化,该转录因子活性芯片小但检测到了已经报道的活性发生变化的转录因子,如PPAR家族和C/EBP家族外,还发现了以前没有报道过的SRF等,充分显示了芯片技术的高通量优势和发现新数据的能力.
轉錄因子是一類具有序列特異性的雙鏈DNA結閤蛋白.在哺乳動物細胞中, 一箇轉錄因子可以調控多箇靶基因,一箇基因也同時受到多箇轉錄因子的調控,從而形成複雜的基因錶達網絡調摔機製.在蛋白質水平檢測特定狀態下組織或細胞中的轉錄因予活性對深入研究基因錶達調控的分子機製具有重要的意義.針對TRANsFAc數據庫提供的226箇小鼠轉錄因子的PSSM,設計瞭240箇轉錄因子結閤探針,構建瞭可以在蛋白質水平同時檢測約200箇小鼠轉錄因子的微陣列芯片,實驗結果顯示:a.針對含有不同DNA結閤結構域的7箇轉錄因子,進行依賴于抗體的轉錄因子活性檢測,結果證明該芯片具有良好的特異性;b.針對NFkB轉錄因子純品,芯片的檢測靈敏度町以達到0.5 nmol/L,線性範圍為O.5～20 nmol/L,錶明芯片具有較高的靈敏度和良好的定量能力;c.針對經典的IKK,JNK信號通路和JAK/STAT信號通路,該芯片可以檢測劍其關鍵轉錄因子的活性變化,證明芯片的可靠性;d.針對小鼠前脂肪細胞繫3T3-L1的分化,該轉錄因子活性芯片小但檢測到瞭已經報道的活性髮生變化的轉錄因子,如PPAR傢族和C/EBP傢族外,還髮現瞭以前沒有報道過的SRF等,充分顯示瞭芯片技術的高通量優勢和髮現新數據的能力.
전록인자시일류구유서렬특이성적쌍련DNA결합단백.재포유동물세포중, 일개전록인자가이조공다개파기인,일개기인야동시수도다개전록인자적조공,종이형성복잡적기인표체망락조솔궤제.재단백질수평검측특정상태하조직혹세포중적전록인여활성대심입연구기인표체조공적분자궤제구유중요적의의.침대TRANsFAc수거고제공적226개소서전록인자적PSSM,설계료240개전록인자결합탐침,구건료가이재단백질수평동시검측약200개소서전록인자적미진렬심편,실험결과현시:a.침대함유불동DNA결합결구역적7개전록인자,진행의뢰우항체적전록인자활성검측,결과증명해심편구유량호적특이성;b.침대NFkB전록인자순품,심편적검측령민도정이체도0.5 nmol/L,선성범위위O.5～20 nmol/L,표명심편구유교고적령민도화량호적정량능력;c.침대경전적IKK,JNK신호통로화JAK/STAT신호통로,해심편가이검측검기관건전록인자적활성변화,증명심편적가고성;d.침대소서전지방세포계3T3-L1적분화,해전록인자활성심편소단검측도료이경보도적활성발생변화적전록인자,여PPAR가족화C/EBP가족외,환발현료이전몰유보도과적SRF등,충분현시료심편기술적고통량우세화발현신수거적능력.
