新疆农业大学学报
新疆農業大學學報
신강농업대학학보
JOURNAL OF XINJIANG AGRICULTURAL UNIVERSITY
2010年
2期
146-150
,共5页
刘腾飞%马素贞%申卫红%陶玉成%陈胜男%简子健
劉騰飛%馬素貞%申衛紅%陶玉成%陳勝男%簡子健
류등비%마소정%신위홍%도옥성%진성남%간자건
犬副流感病毒%NP蛋白%RT-PCR%克隆%原核表达%免疫活性
犬副流感病毒%NP蛋白%RT-PCR%剋隆%原覈錶達%免疫活性
견부류감병독%NP단백%RT-PCR%극륭%원핵표체%면역활성
以犬副流感病毒RNA为模板,采用RT-PCR方法,连接pMD18-T载体获取NP蛋白编码基因核苷酸序列,并应用定向克隆技术,构建原核表达载体pGEX-6P-1-NP.经测序鉴定证实获取的NP蛋白核苷酸序列与GeneBank中标准序列存在两处碱基变异,导致编码的蛋白质出现一个氨基酸的变异.测序结果表明,克隆出的目的基因序列已定向克隆到pGEX-6P-1载体,成功构建了其原核表达载体,并能在大肠杆菌BL21(DE3)中得到表达.Westen-Blotting分析结果显示,表达的GST-pGEX-6P-1-NP重组融合蛋白为82.1 kDa,可被犬副流感阳性血清所识别,表明NP基因所编码的蛋白具有一定的免疫活性.
以犬副流感病毒RNA為模闆,採用RT-PCR方法,連接pMD18-T載體穫取NP蛋白編碼基因覈苷痠序列,併應用定嚮剋隆技術,構建原覈錶達載體pGEX-6P-1-NP.經測序鑒定證實穫取的NP蛋白覈苷痠序列與GeneBank中標準序列存在兩處堿基變異,導緻編碼的蛋白質齣現一箇氨基痠的變異.測序結果錶明,剋隆齣的目的基因序列已定嚮剋隆到pGEX-6P-1載體,成功構建瞭其原覈錶達載體,併能在大腸桿菌BL21(DE3)中得到錶達.Westen-Blotting分析結果顯示,錶達的GST-pGEX-6P-1-NP重組融閤蛋白為82.1 kDa,可被犬副流感暘性血清所識彆,錶明NP基因所編碼的蛋白具有一定的免疫活性.
이견부류감병독RNA위모판,채용RT-PCR방법,련접pMD18-T재체획취NP단백편마기인핵감산서렬,병응용정향극륭기술,구건원핵표체재체pGEX-6P-1-NP.경측서감정증실획취적NP단백핵감산서렬여GeneBank중표준서렬존재량처감기변이,도치편마적단백질출현일개안기산적변이.측서결과표명,극륭출적목적기인서렬이정향극륭도pGEX-6P-1재체,성공구건료기원핵표체재체,병능재대장간균BL21(DE3)중득도표체.Westen-Blotting분석결과현시,표체적GST-pGEX-6P-1-NP중조융합단백위82.1 kDa,가피견부류감양성혈청소식별,표명NP기인소편마적단백구유일정적면역활성.
