生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2010年
4期
494-496
,共3页
施庆国%李山虎%钱晓龙%周建光
施慶國%李山虎%錢曉龍%週建光
시경국%리산호%전효룡%주건광
重组酶%Exo%Beta%Gam%表达%纯化
重組酶%Exo%Beta%Gam%錶達%純化
중조매%Exo%Beta%Gam%표체%순화
目的:构建exo、beta和gam基因的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达、制备重组酶Exo、Beta和Gam.方法:将exo、beta和gam基因分别构建在原核表达载体pEGKG和pET28a上,分别转化大肠杆菌BL21(DE3)和DH5α,经IPTG诱导后,在大肠杆菌中获得可溶性表达蛋白,用柱层析方法纯化蛋白.结果:构建了原核表达质粒pET28a-exo、pET28a-beta、pET28a-gam和pEGKG-exo、pEGKG-beta、pEGKG-gam;SDS-PAGE结果表明重组酶融合蛋白His-Exo、GST-Exo、His-Beta、GST-Beta、His-Gam、GST-Gam得到可溶性表达;用His标签抗体和GST标签抗体通过Western印迹方法检测到纯化后的融合蛋白.结论:在大肠杆菌中诱导表达了入噬菌体重组酶,并纯化获得了一定量的纯度较好的蛋白,为下一步制备检测用多克隆抗体奠定了基础.
目的:構建exo、beta和gam基因的原覈錶達質粒,在大腸桿菌中錶達、製備重組酶Exo、Beta和Gam.方法:將exo、beta和gam基因分彆構建在原覈錶達載體pEGKG和pET28a上,分彆轉化大腸桿菌BL21(DE3)和DH5α,經IPTG誘導後,在大腸桿菌中穫得可溶性錶達蛋白,用柱層析方法純化蛋白.結果:構建瞭原覈錶達質粒pET28a-exo、pET28a-beta、pET28a-gam和pEGKG-exo、pEGKG-beta、pEGKG-gam;SDS-PAGE結果錶明重組酶融閤蛋白His-Exo、GST-Exo、His-Beta、GST-Beta、His-Gam、GST-Gam得到可溶性錶達;用His標籤抗體和GST標籤抗體通過Western印跡方法檢測到純化後的融閤蛋白.結論:在大腸桿菌中誘導錶達瞭入噬菌體重組酶,併純化穫得瞭一定量的純度較好的蛋白,為下一步製備檢測用多剋隆抗體奠定瞭基礎.
목적:구건exo、beta화gam기인적원핵표체질립,재대장간균중표체、제비중조매Exo、Beta화Gam.방법:장exo、beta화gam기인분별구건재원핵표체재체pEGKG화pET28a상,분별전화대장간균BL21(DE3)화DH5α,경IPTG유도후,재대장간균중획득가용성표체단백,용주층석방법순화단백.결과:구건료원핵표체질립pET28a-exo、pET28a-beta、pET28a-gam화pEGKG-exo、pEGKG-beta、pEGKG-gam;SDS-PAGE결과표명중조매융합단백His-Exo、GST-Exo、His-Beta、GST-Beta、His-Gam、GST-Gam득도가용성표체;용His표첨항체화GST표첨항체통과Western인적방법검측도순화후적융합단백.결론:재대장간균중유도표체료입서균체중조매,병순화획득료일정량적순도교호적단백,위하일보제비검측용다극륭항체전정료기출.
