CAJ | 학술논문

目的研究骨形态蛋白2(BMP2)小分子干扰RNA(siRNA)靶向抑制对人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)由白介素6(IL-6)诱导刺激的成骨样分化和细胞层钙化的影响.方法以体外培养的原代HUASMC作为实验对象.建立RNA干扰(RNAi)实验平台,通过FAM标记阴性对照siRNA优化转染条件;将BMP2基因的4条候选siRNA分别转染原代HUASMC,Real-Time PCR检测BMP2 mRNA表达,筛选有效抑制siRNA.将复苏的原代HUASMC分为siRNA转染组(转染有效抑制siRNA)和模拟转染组(对照组,不转染siRNA),两组均加入重组人IL-6(rhIL-6)(10 ng/mL)刺激孵育,Real-Time PCR检测刺激孵育12、48 h时点成骨样转化相关基因BMP2、骨特异性碱性磷酸酶(BAP)、骨钙素(OC)和骨桥蛋白(OPN)mRNA表达.将复苏的原代HUASMC分为siRNA转染组、对照组和空白组(不予rhIL-6刺激孵育,其余处理与对照组相同),siRNA转染组和对照组均加入rhIL-6(50 ng/mL)刺激孵育,甲氧-酚酞络合酮法检测rhIL-6刺激孵育前及孵育后2、4 d时点各组HUASMC细胞层钙盐含量,以总蛋白含量校正.结果成功建立合适的RNAi实验平台.10 ng/mL rhIL-6刺激孵育后12 h时点, siRNA转染组HUASMC BMP2和BAP mRNA表达明显低于对照组(P<0.05);刺激孵育后48 h时点,siRNA转染组OC和OPN mRNA表达显著低于对照组(P<0.05).加入50 ng/mL rhIL-6刺激孵育前,siRNA转染组、对照组和空白组HUASMC细胞层钙盐含量比较差异无统计学意义(P>0.05);在siRNA转染组,50 ng/mL rhIL-6刺激孵育后2 、4 d时点的细胞层钙盐含量均明显低于对照组(P<0.05),刺激孵育后2 d时点的细胞层钙盐含量明显高于空白组(P<0.05).结论体外培养的原代HUASMC能够实现BMP2基因的siRNA靶向抑制,能显著抑制由IL-6诱导刺激的成骨样分化和钙化.
목적 연구골형태단백2(BMP2)소분자간우RNA(siRNA)파향억제대인제동맥평활기세포(HUASMC)유백개소6(IL-6)유도자격적성골양분화화세포층개화적영향.방법 이체외배양적원대HUASMC작위실험대상.건립RNA간우(RNAi)실험평태,통과FAM표기음성대조siRNA우화전염조건;장BMP2기인적4조후선siRNA분별전염원대HUASMC,Real-Time PCR검측BMP2 mRNA표체,사선유효억제siRNA.장복소적원대HUASMC분위siRNA전염조(전염유효억제siRNA)화모의전염조(대조조,불전염siRNA),량조균가입중조인IL-6(rhIL-6)(10 ng/mL)자격부육,Real-Time PCR검측자격부육12、48 h시점성골양전화상관기인BMP2、골특이성감성린산매(BAP)、골개소(OC)화골교단백(OPN)mRNA표체.장복소적원대HUASMC분위siRNA전염조、대조조화공백조(불여rhIL-6자격부육,기여처리여대조조상동),siRNA전염조화대조조균가입rhIL-6(50 ng/mL)자격부육,갑양-분태락합동법검측rhIL-6자격부육전급부육후2、4 d시점각조HUASMC세포층개염함량,이총단백함량교정.결과 성공건립합괄적RNAi실험평태.10 ng/mL rhIL-6자격부육후12 h시점, siRNA전염조HUASMC BMP2화BAP mRNA표체명현저우대조조(P<0.05);자격부육후48 h시점,siRNA전염조OC화OPN mRNA표체현저저우대조조(P<0.05).가입50 ng/mL rhIL-6자격부육전,siRNA전염조、대조조화공백조HUASMC세포층개염함량비교차이무통계학의의(P>0.05);재siRNA전염조,50 ng/mL rhIL-6자격부육후2 、4 d시점적세포층개염함량균명현저우대조조(P<0.05),자격부육후2 d시점적세포층개염함량명현고우공백조(P<0.05).결론 체외배양적원대HUASMC능구실현BMP2기인적siRNA파향억제,능현저억제유IL-6유도자격적성골양분화화개화.