西安交通大学学报（医学版）
西安交通大學學報（醫學版）
서안교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2011年
1期
50-53,88
,共5页
周爱萍%韩蕾%王娟%段艳%吴晓康%徐纪茹
週愛萍%韓蕾%王娟%段豔%吳曉康%徐紀茹
주애평%한뢰%왕연%단염%오효강%서기여
结核分枝杆菌%DnaA蛋白%DNA复制起始%原核表达
結覈分枝桿菌%DnaA蛋白%DNA複製起始%原覈錶達
결핵분지간균%DnaA단백%DNA복제기시%원핵표체
目的 在大肠杆菌中表达重组结核杆菌DnaA蛋白,对表达产物进行纯化、鉴定后制备DnaA蛋白特异性免疫血清并进行Western blot检测.方法 以结核分枝杆菌标准菌株H37Rv基因组为模板,PCR扩增DnaA基因,构建DnaA原核表达质粒pET-DnaA,转化表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,非变性条件下镍琼脂糖凝胶亲和层析纯化重组蛋白pET-DnaA,并用Western blot检测和鉴定重组蛋白,用纯化得到的重组蛋白制备特异性免疫血清.结果 成功构建了结核杆菌pET-DnaA重组质粒,并在大肠杆菌中得到高效表达;用分离纯化后的重组蛋白免疫动物,获得高效价的特异性免疫血清.结论 结核杆菌DnaA蛋白及其特异性抗体的成功制备,为进一步研究该蛋白在结核菌DNA复制机制中的作用奠定了基础.
目的 在大腸桿菌中錶達重組結覈桿菌DnaA蛋白,對錶達產物進行純化、鑒定後製備DnaA蛋白特異性免疫血清併進行Western blot檢測.方法 以結覈分枝桿菌標準菌株H37Rv基因組為模闆,PCR擴增DnaA基因,構建DnaA原覈錶達質粒pET-DnaA,轉化錶達宿主大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導重組蛋白錶達,非變性條件下鎳瓊脂糖凝膠親和層析純化重組蛋白pET-DnaA,併用Western blot檢測和鑒定重組蛋白,用純化得到的重組蛋白製備特異性免疫血清.結果 成功構建瞭結覈桿菌pET-DnaA重組質粒,併在大腸桿菌中得到高效錶達;用分離純化後的重組蛋白免疫動物,穫得高效價的特異性免疫血清.結論 結覈桿菌DnaA蛋白及其特異性抗體的成功製備,為進一步研究該蛋白在結覈菌DNA複製機製中的作用奠定瞭基礎.
목적 재대장간균중표체중조결핵간균DnaA단백,대표체산물진행순화、감정후제비DnaA단백특이성면역혈청병진행Western blot검측.방법 이결핵분지간균표준균주H37Rv기인조위모판,PCR확증DnaA기인,구건DnaA원핵표체질립pET-DnaA,전화표체숙주대장간균BL21(DE3),IPTG유도중조단백표체,비변성조건하얼경지당응효친화층석순화중조단백pET-DnaA,병용Western blot검측화감정중조단백,용순화득도적중조단백제비특이성면역혈청.결과 성공구건료결핵간균pET-DnaA중조질립,병재대장간균중득도고효표체;용분리순화후적중조단백면역동물,획득고효개적특이성면역혈청.결론 결핵간균DnaA단백급기특이성항체적성공제비,위진일보연구해단백재결핵균DNA복제궤제중적작용전정료기출.
