中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2012年
6期
597-601
,共5页
周松峰%廖文军%覃绍敏%袁书智%白安斌%吴健敏
週鬆峰%廖文軍%覃紹敏%袁書智%白安斌%吳健敏
주송봉%료문군%담소민%원서지%백안빈%오건민
狂犬病毒%G基因%单链抗体%双功能融合蛋白%原核表达
狂犬病毒%G基因%單鏈抗體%雙功能融閤蛋白%原覈錶達
광견병독%G기인%단련항체%쌍공능융합단백%원핵표체
目的 为构建具有凝集性、免疫反应性的双功能融合蛋白.方法 本研究利用特异性引物从重组质粒pMD2E8scFv和pMD-G中以PCR方法扩增2E8基因(抗人红细胞H抗原单链抗体基因)和Kg基因(狂犬病毒G基因主要抗原表位区),采用重叠延伸(SOE) PCR法拼接成融合基因2E8Kg,构建原核表达质粒pET-Trx-2E8Kg并将其转化至BL21 (DE3)pLysS中进行诱导表达并对诱导菌液进行SDS-PAGE分析.结果 2E8Kg融合基因获得了高效表达并主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的23.5％左右,分子量约为77.7kD,与预期的大小一致.将表达的蛋白以亲和层析法进行纯化并通过谷胱甘肽还原法进行复性,纯化后蛋白纯度达到98.9％.结论 经Western-blot检测和红细胞凝集试验证明,2ESkg融合蛋白既能够与狂犬病毒(RV)高免血清发生特异性反应,又能够与人红细胞结合,具有双功能特性.
目的 為構建具有凝集性、免疫反應性的雙功能融閤蛋白.方法 本研究利用特異性引物從重組質粒pMD2E8scFv和pMD-G中以PCR方法擴增2E8基因(抗人紅細胞H抗原單鏈抗體基因)和Kg基因(狂犬病毒G基因主要抗原錶位區),採用重疊延伸(SOE) PCR法拼接成融閤基因2E8Kg,構建原覈錶達質粒pET-Trx-2E8Kg併將其轉化至BL21 (DE3)pLysS中進行誘導錶達併對誘導菌液進行SDS-PAGE分析.結果 2E8Kg融閤基因穫得瞭高效錶達併主要以包涵體形式存在,錶達量佔菌體總蛋白的23.5％左右,分子量約為77.7kD,與預期的大小一緻.將錶達的蛋白以親和層析法進行純化併通過穀胱甘肽還原法進行複性,純化後蛋白純度達到98.9％.結論 經Western-blot檢測和紅細胞凝集試驗證明,2ESkg融閤蛋白既能夠與狂犬病毒(RV)高免血清髮生特異性反應,又能夠與人紅細胞結閤,具有雙功能特性.
목적 위구건구유응집성、면역반응성적쌍공능융합단백.방법 본연구이용특이성인물종중조질립pMD2E8scFv화pMD-G중이PCR방법확증2E8기인(항인홍세포H항원단련항체기인)화Kg기인(광견병독G기인주요항원표위구),채용중첩연신(SOE) PCR법병접성융합기인2E8Kg,구건원핵표체질립pET-Trx-2E8Kg병장기전화지BL21 (DE3)pLysS중진행유도표체병대유도균액진행SDS-PAGE분석.결과 2E8Kg융합기인획득료고효표체병주요이포함체형식존재,표체량점균체총단백적23.5％좌우,분자량약위77.7kD,여예기적대소일치.장표체적단백이친화층석법진행순화병통과곡광감태환원법진행복성,순화후단백순도체도98.9％.결론 경Western-blot검측화홍세포응집시험증명,2ESkg융합단백기능구여광견병독(RV)고면혈청발생특이성반응,우능구여인홍세포결합,구유쌍공능특성.
