CAJ | 학술논문

目的建立和优化肝细胞内乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)的检测方法.方法蛋白酶K裂解法释放肝细胞核内HBV cccDNA及基因组DNA,细胞裂解液进行核酸纯化后用酚-氯仿法抽提,并采用酶消化和设计特异性引物两种方法排除其他病毒复制中间体对检测结果的干扰,最后进行聚合酶链式反应(PCR).结果以HBV松弛环状DNA(rcDNA)、阴性肝细胞、阴性血清作为对照,以包含HBV基因组全序列的质粒作为阳性对照,HBV感染者肝组织的PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳后出现的条带与目标片段分子量相等,且产物的DNA测序结果显示其序列与目标序列一致.外周血HBeAg(+)患者组肝组织检测结果的阳性率高于HBeAg(-)患者组.结论该方法检测肝细胞内cccDNA具有较高的特异性、敏感性,且成本较低.本方法临床标本初步检测结果显示病毒复制活跃患者肝组织中HBV cccDNA的阳性率较复制低的患者为高.
목적건립화우화간세포내을형간염병독(HBV)공개폐합배상DNA(cccDNA)적검측방법.방법단백매K렬해법석방간세포핵내HBV cccDNA급기인조DNA,세포렬해액진행핵산순화후용분-록방법추제,병채용매소화화설계특이성인물량충방법배제기타병독복제중간체대검측결과적간우,최후진행취합매련식반응(PCR).결과이HBV송이배상DNA(rcDNA)、음성간세포、음성혈청작위대조,이포함HBV기인조전서렬적질립작위양성대조,HBV감염자간조직적PCR확증산물진행경지당응효전영후출현적조대여목표편단분자량상등,차산물적DNA측서결과현시기서렬여목표서렬일치.외주혈HBeAg(+)환자조간조직검측결과적양성솔고우HBeAg(-)환자조.결론해방법검측간세포내cccDNA구유교고적특이성、민감성,차성본교저.본방법림상표본초보검측결과현시병독복제활약환자간조직중HBV cccDNA적양성솔교복제저적환자위고.