CAJ | 학술논문

目的:采用骨髓间充质干细胞体外向软骨方向诱导分化并和两种载体(胶原海绵和聚乳酸/聚羟乙酸共聚物)混合形成立体培养,对两种不同生物材料的生物相容性进行观察.方法:实验于2005-03/2006-05在华北煤炭医学院中心实验室完成.①实验材料:清洁级成年SD大鼠1只,雌雄不限;聚乳酸/聚羟乙酸共聚物(山东医疗器械研究所高分子室),胶原海绵(上海其胜公司).②实验分组:实验分为3组,即聚乳酸/聚羟乙酸共聚物组、胶原海绵组和平面培养组.③实验干预:取成年大鼠骨髓以密度梯度离心加贴壁分离法纯化分离骨髓间充质干细胞,传至第3代.将细胞以1.5×104/孔定量接种于各组的培养板内,加全培养诱导液[转化生长因子β1 10 μg、碱性成纤维生长因子10 μg、地塞米松100 nmol、维生素C 50 mg、β-甘油磷酸钠10 mmol和ITS 50 mL(牛血清白蛋白,牛转铁蛋白,牛胰岛素及微量元素)].④实验评估:培养1周后,随机取样使用甲苯氨蓝染色和特异性Ⅱ型胶原单克隆抗体免疫组织化学染色后进行检测.培养4周后使用扫描电镜观察细胞在载体上附着和生长的情况.结果:①骨髓间充质干细胞生长情况及形态:3周后倒置相差显微镜观察,可见细胞围绕在材料周边生长,随培养时间的延长,细胞形成均一的椭圆形,各载体组的细胞与平面对照组相似,无细胞衰老及异常分裂现象.②软骨细胞特异性检测:3组间甲苯氨蓝染色和特异性Ⅱ型胶原单克隆抗体免疫组织化学染色差异无显著性.③载体材料扫描电镜观察结果:在两种载体表面,分别有部分细胞黏附在载体表面生长,并在其表面连接成片.结论:胶原海绵和聚乳酸/聚羟乙酸共聚物对大鼠骨髓间充质干细胞在向软骨诱导过程中的细胞功能、细胞生长增殖无影响,两种生物材料具有良好的生物相容性,可作为软骨组织工程的载体材料应用. 目的:採用骨髓間充質榦細胞體外嚮軟骨方嚮誘導分化併和兩種載體(膠原海綿和聚乳痠/聚羥乙痠共聚物)混閤形成立體培養,對兩種不同生物材料的生物相容性進行觀察.方法:實驗于2005-03/2006-05在華北煤炭醫學院中心實驗室完成.①實驗材料:清潔級成年SD大鼠1隻,雌雄不限;聚乳痠/聚羥乙痠共聚物(山東醫療器械研究所高分子室),膠原海綿(上海其勝公司).②實驗分組:實驗分為3組,即聚乳痠/聚羥乙痠共聚物組、膠原海綿組和平麵培養組.③實驗榦預:取成年大鼠骨髓以密度梯度離心加貼壁分離法純化分離骨髓間充質榦細胞,傳至第3代.將細胞以1.5×104/孔定量接種于各組的培養闆內,加全培養誘導液[轉化生長因子β1 10 μg、堿性成纖維生長因子10 μg、地塞米鬆100 nmol、維生素C 50 mg、β-甘油燐痠鈉10 mmol和ITS 50 mL(牛血清白蛋白,牛轉鐵蛋白,牛胰島素及微量元素)].④實驗評估:培養1週後,隨機取樣使用甲苯氨藍染色和特異性Ⅱ型膠原單剋隆抗體免疫組織化學染色後進行檢測.培養4週後使用掃描電鏡觀察細胞在載體上附著和生長的情況.結果:①骨髓間充質榦細胞生長情況及形態:3週後倒置相差顯微鏡觀察,可見細胞圍繞在材料週邊生長,隨培養時間的延長,細胞形成均一的橢圓形,各載體組的細胞與平麵對照組相似,無細胞衰老及異常分裂現象.②軟骨細胞特異性檢測:3組間甲苯氨藍染色和特異性Ⅱ型膠原單剋隆抗體免疫組織化學染色差異無顯著性.③載體材料掃描電鏡觀察結果:在兩種載體錶麵,分彆有部分細胞黏附在載體錶麵生長,併在其錶麵連接成片.結論:膠原海綿和聚乳痠/聚羥乙痠共聚物對大鼠骨髓間充質榦細胞在嚮軟骨誘導過程中的細胞功能、細胞生長增殖無影響,兩種生物材料具有良好的生物相容性,可作為軟骨組織工程的載體材料應用.
목적:채용골수간충질간세포체외향연골방향유도분화병화량충재체(효원해면화취유산/취간을산공취물)혼합형성입체배양,대량충불동생물재료적생물상용성진행관찰.방법:실험우2005-03/2006-05재화북매탄의학원중심실험실완성.①실험재료:청길급성년SD대서1지,자웅불한;취유산/취간을산공취물(산동의료기계연구소고분자실),효원해면(상해기성공사).②실험분조:실험분위3조,즉취유산/취간을산공취물조、효원해면조화평면배양조.③실험간예:취성년대서골수이밀도제도리심가첩벽분리법순화분리골수간충질간세포,전지제3대.장세포이1.5×104/공정량접충우각조적배양판내,가전배양유도액[전화생장인자β1 10 μg、감성성섬유생장인자10 μg、지새미송100 nmol、유생소C 50 mg、β-감유린산납10 mmol화ITS 50 mL(우혈청백단백,우전철단백,우이도소급미량원소)].④실험평고:배양1주후,수궤취양사용갑분안람염색화특이성Ⅱ형효원단극륭항체면역조직화학염색후진행검측.배양4주후사용소묘전경관찰세포재재체상부착화생장적정황.결과:①골수간충질간세포생장정황급형태:3주후도치상차현미경관찰,가견세포위요재재료주변생장,수배양시간적연장,세포형성균일적타원형,각재체조적세포여평면대조조상사,무세포쇠로급이상분렬현상.②연골세포특이성검측:3조간갑분안람염색화특이성Ⅱ형효원단극륭항체면역조직화학염색차이무현저성.③재체재료소묘전경관찰결과:재량충재체표면,분별유부분세포점부재재체표면생장,병재기표면련접성편.결론:효원해면화취유산/취간을산공취물대대서골수간충질간세포재향연골유도과정중적세포공능、세포생장증식무영향,량충생물재료구유량호적생물상용성,가작위연골조직공정적재체재료응용.