分子细胞生物学报
分子細胞生物學報
분자세포생물학보
JOURNAL OF MOLECULAR CELL BIOLOGY
2007年
4期
223-231
,共9页
周延清%牛敬媛%郝瑞文%林雪%贾敬芬%郝建国%卢龙斗
週延清%牛敬媛%郝瑞文%林雪%賈敬芬%郝建國%盧龍鬥
주연청%우경원%학서문%림설%가경분%학건국%로룡두
怀地黄%发根农杆菌%毛状根%植株再生%Southern blot%冠瘿碱纸电泳
懷地黃%髮根農桿菌%毛狀根%植株再生%Southern blot%冠癭堿紙電泳
부지황%발근농간균%모상근%식주재생%Southern blot%관영감지전영
利用发根农杆菌15834菌株感染怀地黄组培苗子叶、叶柄和茎切段,建立了有效的毛状根培养及其植株再生体系.毛状根可直接从受伤的外植体产生,能在无外源激素的1/2MS固体和液体培养基上自主生长,表现出典型的发根特征.用100μmol/L乙酰丁香酮处理对数生长期的农杆菌菌液感染子叶获得了46.7%的最高转化频率;在附加0.2mg/L KT和3.0mg/L6-BA的1/2 MS培养基上,毛状根能100%形成愈伤组织,51.49%分化出芽;分化芽在1/2 MS培养基上100%生根,形成具有矮化、节间短和根系发达等特征的转化再生植株且移栽后生长旺盛;1个转化毛状根克隆的梓醇含量为0.557mg/g,是鲜地黄梓醇含量的48.5%,是生地鲜重梓醇含量的18%.rolB基因PCR、Southern blot分析、冠瘿碱纸电泳和RT-PCR扩增检测证明农杆菌Ri质粒上的T-DNA整合到怀地黄基因组中并表达.
利用髮根農桿菌15834菌株感染懷地黃組培苗子葉、葉柄和莖切段,建立瞭有效的毛狀根培養及其植株再生體繫.毛狀根可直接從受傷的外植體產生,能在無外源激素的1/2MS固體和液體培養基上自主生長,錶現齣典型的髮根特徵.用100μmol/L乙酰丁香酮處理對數生長期的農桿菌菌液感染子葉穫得瞭46.7%的最高轉化頻率;在附加0.2mg/L KT和3.0mg/L6-BA的1/2 MS培養基上,毛狀根能100%形成愈傷組織,51.49%分化齣芽;分化芽在1/2 MS培養基上100%生根,形成具有矮化、節間短和根繫髮達等特徵的轉化再生植株且移栽後生長旺盛;1箇轉化毛狀根剋隆的梓醇含量為0.557mg/g,是鮮地黃梓醇含量的48.5%,是生地鮮重梓醇含量的18%.rolB基因PCR、Southern blot分析、冠癭堿紙電泳和RT-PCR擴增檢測證明農桿菌Ri質粒上的T-DNA整閤到懷地黃基因組中併錶達.
이용발근농간균15834균주감염부지황조배묘자협、협병화경절단,건립료유효적모상근배양급기식주재생체계.모상근가직접종수상적외식체산생,능재무외원격소적1/2MS고체화액체배양기상자주생장,표현출전형적발근특정.용100μmol/L을선정향동처리대수생장기적농간균균액감염자협획득료46.7%적최고전화빈솔;재부가0.2mg/L KT화3.0mg/L6-BA적1/2 MS배양기상,모상근능100%형성유상조직,51.49%분화출아;분화아재1/2 MS배양기상100%생근,형성구유왜화、절간단화근계발체등특정적전화재생식주차이재후생장왕성;1개전화모상근극륭적재순함량위0.557mg/g,시선지황재순함량적48.5%,시생지선중재순함량적18%.rolB기인PCR、Southern blot분석、관영감지전영화RT-PCR확증검측증명농간균Ri질립상적T-DNA정합도부지황기인조중병표체.
