卫生研究
衛生研究
위생연구
JOURNAL OF HYGIENE RESEARCH
2007年
2期
159-162
,共4页
高绪芳%饶朝龙%文卫华%帅培强%叶运莉%衡正昌
高緒芳%饒朝龍%文衛華%帥培彊%葉運莉%衡正昌
고서방%요조룡%문위화%수배강%협운리%형정창
依赖随机化末端连接物PCR%DNA损伤%定位检测%核苷酸
依賴隨機化末耑連接物PCR%DNA損傷%定位檢測%覈苷痠
의뢰수궤화말단련접물PCR%DNA손상%정위검측%핵감산
目的 简化RDPCR建立程序,并在核酸序列水平精确定位DNA损伤. 方法 培养TK6细胞,抽提基因组DNA,制备k-ras基因外显子2的单链探针.扩增k-ras基因外显子2(以下称短片段).酶切短片段和基因组DNA构建损伤模型,前者经依赖随机化末端连接物PCR(RDPCR)扩增,每一步产物作凝胶电泳,终产物与单链探针杂交显色,并进行测序;后者以短片段建立的实验条件进行RDPCR扩增,产物与单链探针杂交显色,并进行测序. 结果 凝胶电泳可见酶切短片段在RDPCR中每一步骤的目的 产物条带;酶切短片段和酶切基因组DNA的RDPCR产物均在相应位置出现杂交条带,测序证实损伤均位于Hinfl在k-ras外显子2上的酶切位点. 结论 短片段建立RDPCR的实验条件简单易行;并首次利用RDPCR检测DNA损伤精确定位于核酸序列水平的碱基位置.
目的 簡化RDPCR建立程序,併在覈痠序列水平精確定位DNA損傷. 方法 培養TK6細胞,抽提基因組DNA,製備k-ras基因外顯子2的單鏈探針.擴增k-ras基因外顯子2(以下稱短片段).酶切短片段和基因組DNA構建損傷模型,前者經依賴隨機化末耑連接物PCR(RDPCR)擴增,每一步產物作凝膠電泳,終產物與單鏈探針雜交顯色,併進行測序;後者以短片段建立的實驗條件進行RDPCR擴增,產物與單鏈探針雜交顯色,併進行測序. 結果 凝膠電泳可見酶切短片段在RDPCR中每一步驟的目的 產物條帶;酶切短片段和酶切基因組DNA的RDPCR產物均在相應位置齣現雜交條帶,測序證實損傷均位于Hinfl在k-ras外顯子2上的酶切位點. 結論 短片段建立RDPCR的實驗條件簡單易行;併首次利用RDPCR檢測DNA損傷精確定位于覈痠序列水平的堿基位置.
목적 간화RDPCR건립정서,병재핵산서렬수평정학정위DNA손상. 방법 배양TK6세포,추제기인조DNA,제비k-ras기인외현자2적단련탐침.확증k-ras기인외현자2(이하칭단편단).매절단편단화기인조DNA구건손상모형,전자경의뢰수궤화말단련접물PCR(RDPCR)확증,매일보산물작응효전영,종산물여단련탐침잡교현색,병진행측서;후자이단편단건립적실험조건진행RDPCR확증,산물여단련탐침잡교현색,병진행측서. 결과 응효전영가견매절단편단재RDPCR중매일보취적목적 산물조대;매절단편단화매절기인조DNA적RDPCR산물균재상응위치출현잡교조대,측서증실손상균위우Hinfl재k-ras외현자2상적매절위점. 결론 단편단건립RDPCR적실험조건간단역행;병수차이용RDPCR검측DNA손상정학정위우핵산서렬수평적감기위치.
