青岛大学医学院学报
青島大學醫學院學報
청도대학의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE QINGDAO UNIVERSITATIS
2009年
4期
335-338,342
,共5页
王海燕%谭丽莉%江彩玉%葛银林
王海燕%譚麗莉%江綵玉%葛銀林
왕해연%담려리%강채옥%갈은림
树突细胞%血管内皮生长因子%RNA干扰%MCF-7细胞
樹突細胞%血管內皮生長因子%RNA榦擾%MCF-7細胞
수돌세포%혈관내피생장인자%RNA간우%MCF-7세포
目的 探讨抑制MCF-7乳癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达对树突细胞(DC)免疫功能的影响.方法 针对VEGF基因设计小干扰RNA(siRNA),以脂质体转染法将 siRNA导入乳癌细胞MCF-7,RT-PCR 检测干扰VEGF基因后mRNA的表达,Western blotting法检测VEGF蛋白的表达,观察VEGF基因沉默效果.以MCF-7 乳癌细胞的培养上清和干扰VEGF基因后MCF-7 乳癌细胞培养上清液同时添加粒-单细胞集落刺激因子、白细胞介素-4、肿瘤坏死因子α培养正常异基因DC,利用MTT法和Hoechst33258检测DC刺激正常外周血T细胞增殖的能力及DC激发的细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤活性;ELISA法检测DC培养上清液中白细胞介素12(IL-12)及DC与外周血单个核细胞(PBMC)共同培养液中干扰素γ(IFN-γ)的含量.结果 VEGF基因经siRNA处理24 h后,MCF-7 乳癌细胞VEGF mRNA和蛋白的表达明显降低,其诱生的DC与MCF-7 乳癌细胞培养上清液诱生的DC相比, siRNA处理DC刺激T淋巴细胞增殖能力、CTL杀伤活性以及DC分泌IL-12和协同刺激外周血PBMC分泌INF-γ的能力明显增强.结论 siRNA可靶向抑制乳癌MCF-7 细胞VEGF的表达,下调VEGF后的MCF-7 细胞上清液对DC分化成熟及功能的抑制作用明显降低.
目的 探討抑製MCF-7乳癌細胞血管內皮生長因子(VEGF)的錶達對樹突細胞(DC)免疫功能的影響.方法 針對VEGF基因設計小榦擾RNA(siRNA),以脂質體轉染法將 siRNA導入乳癌細胞MCF-7,RT-PCR 檢測榦擾VEGF基因後mRNA的錶達,Western blotting法檢測VEGF蛋白的錶達,觀察VEGF基因沉默效果.以MCF-7 乳癌細胞的培養上清和榦擾VEGF基因後MCF-7 乳癌細胞培養上清液同時添加粒-單細胞集落刺激因子、白細胞介素-4、腫瘤壞死因子α培養正常異基因DC,利用MTT法和Hoechst33258檢測DC刺激正常外週血T細胞增殖的能力及DC激髮的細胞毒T淋巴細胞(CTL)殺傷活性;ELISA法檢測DC培養上清液中白細胞介素12(IL-12)及DC與外週血單箇覈細胞(PBMC)共同培養液中榦擾素γ(IFN-γ)的含量.結果 VEGF基因經siRNA處理24 h後,MCF-7 乳癌細胞VEGF mRNA和蛋白的錶達明顯降低,其誘生的DC與MCF-7 乳癌細胞培養上清液誘生的DC相比, siRNA處理DC刺激T淋巴細胞增殖能力、CTL殺傷活性以及DC分泌IL-12和協同刺激外週血PBMC分泌INF-γ的能力明顯增彊.結論 siRNA可靶嚮抑製乳癌MCF-7 細胞VEGF的錶達,下調VEGF後的MCF-7 細胞上清液對DC分化成熟及功能的抑製作用明顯降低.
목적 탐토억제MCF-7유암세포혈관내피생장인자(VEGF)적표체대수돌세포(DC)면역공능적영향.방법 침대VEGF기인설계소간우RNA(siRNA),이지질체전염법장 siRNA도입유암세포MCF-7,RT-PCR 검측간우VEGF기인후mRNA적표체,Western blotting법검측VEGF단백적표체,관찰VEGF기인침묵효과.이MCF-7 유암세포적배양상청화간우VEGF기인후MCF-7 유암세포배양상청액동시첨가립-단세포집락자격인자、백세포개소-4、종류배사인자α배양정상이기인DC,이용MTT법화Hoechst33258검측DC자격정상외주혈T세포증식적능력급DC격발적세포독T림파세포(CTL)살상활성;ELISA법검측DC배양상청액중백세포개소12(IL-12)급DC여외주혈단개핵세포(PBMC)공동배양액중간우소γ(IFN-γ)적함량.결과 VEGF기인경siRNA처리24 h후,MCF-7 유암세포VEGF mRNA화단백적표체명현강저,기유생적DC여MCF-7 유암세포배양상청액유생적DC상비, siRNA처리DC자격T림파세포증식능력、CTL살상활성이급DC분비IL-12화협동자격외주혈PBMC분비INF-γ적능력명현증강.결론 siRNA가파향억제유암MCF-7 세포VEGF적표체,하조VEGF후적MCF-7 세포상청액대DC분화성숙급공능적억제작용명현강저.
