CAJ | 학술논문

目的筛选并鉴定可和单核细胞表面CD13分子特异性结合的特异性短肽.方法以CD13为靶分子,用噬菌体展示十二肽库进行筛选,通过亲和富集法筛选表达有特异性结合肽的噬菌体,ELISA鉴定所挑选噬菌体和CD13的亲和力,根据噬菌体基因序列推导出多肽序列.对筛选到的并经比对分析认为有生物学特性的多肽进行人工合成,通过免疫荧光技术检测多肽和THP-1细胞的结合情况、位置及WM15对多肽和细胞结合的阻断作用.结果经过四轮筛选,与CD13特异性结合的噬菌体得到有效富集并最终接近饱和状态.第4轮筛选后回收率与第1轮相比,富集了30倍.挑取的20个噬菌体单克隆中,经ELISA鉴定有10个和CD13的亲和力较高,有阳性意义.经比对得到2个有生物学功能的多肽序列P9、P7,它们分别和人巨细胞病毒(HCMV)UL38、UL105基因编码的相应氨基酸序列有83%、100%相似性.免疫荧光检测可见多肽P9、P7和THP-1细胞的结合位于细胞膜表面.WM15可以不同程度的阻断多肽和细胞的结合.结论成功筛选出了2条可和CD13特异性结合的短肽P9、P7,而且P9、P7可以和THP-1细胞膜表面的CD13分子特异性结合.
목적 사선병감정가화단핵세포표면CD13분자특이성결합적특이성단태.방법 이CD13위파분자,용서균체전시십이태고진행사선,통과친화부집법사선표체유특이성결합태적서균체,ELISA감정소도선서균체화CD13적친화력,근거서균체기인서렬추도출다태서렬.대사선도적병경비대분석인위유생물학특성적다태진행인공합성,통과면역형광기술검측다태화THP-1세포적결합정황、위치급WM15대다태화세포결합적조단작용.결과 경과사륜사선,여CD13특이성결합적서균체득도유효부집병최종접근포화상태.제4륜사선후회수솔여제1륜상비,부집료30배.도취적20개서균체단극륭중,경ELISA감정유10개화CD13적친화력교고,유양성의의.경비대득도2개유생물학공능적다태서렬P9、P7,타문분별화인거세포병독(HCMV)UL38、UL105기인편마적상응안기산서렬유83%、100%상사성.면역형광검측가견다태P9、P7화THP-1세포적결합위우세포막표면.WM15가이불동정도적조단다태화세포적결합.결론 성공사선출료2조가화CD13특이성결합적단태P9、P7,이차P9、P7가이화THP-1세포막표면적CD13분자특이성결합.