海洋渔业
海洋漁業
해양어업
MARINE FISHERIES
2010年
3期
244-250
,共7页
施志仪%胡燕林%张俊玲%靳雨丽
施誌儀%鬍燕林%張俊玲%靳雨麗
시지의%호연림%장준령%근우려
牙鲆%碱性磷酸酶%5′调控区%第一内含子%调控序列%甲状腺激素T3
牙鲆%堿性燐痠酶%5′調控區%第一內含子%調控序列%甲狀腺激素T3
아평%감성린산매%5′조공구%제일내함자%조공서렬%갑상선격소T3
为分析牙鲆碱性磷酸酶基因5'调控区和第一内含子调控序列的功能,本研究运用DNA重组技术将PCR扩增得到的牙鲆碱性磷酸酶基因的5′调控区序列、第一内含子序列及5′调控区和第一内含子串联序列分别插入启动子缺失的增强型绿色荧光蛋白表达载体pAcGFP1-1中,得到pAcGFP1-5′ALP、pAcGFP1-Intron1和pAcGFP1-AI报告基因表达载体.通过脂质体介导重组质粒转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)并检测荧光信号.转染后细胞状态良好,24 h后发现,在倒置荧光显微镜下均可看到不同强度的绿色荧光信号,且荧光信号随时间的延长而增强,其中转染pAcGFP1-AI后的荧光信号强度最强.以上结果表明,牙鲆碱性磷酸酶基因5′调控区和第一个内含子序列均具有启动子活性,且第一内含子与5′调控区存在协同效应,两者协同能增强基因的表达.为了解甲状腺激素T3对调控序列启动子活性的调节作用,用不同浓度的T3处理转染的CHO细胞,24 h后发现加入50、75和100 nM的T3都增强了绿色荧光蛋白的表达,而且信号强度随T3浓度的增加而增强.这表明甲状腺激素T3对牙鲆碱性磷酸酶基因调控序列的启动子活性有一定的增强作用.本研究为深入阐明牙鲆碱性磷酸酶基因转录表达的分子机制提供了实验依据.
為分析牙鲆堿性燐痠酶基因5'調控區和第一內含子調控序列的功能,本研究運用DNA重組技術將PCR擴增得到的牙鲆堿性燐痠酶基因的5′調控區序列、第一內含子序列及5′調控區和第一內含子串聯序列分彆插入啟動子缺失的增彊型綠色熒光蛋白錶達載體pAcGFP1-1中,得到pAcGFP1-5′ALP、pAcGFP1-Intron1和pAcGFP1-AI報告基因錶達載體.通過脂質體介導重組質粒轉染中國倉鼠卵巢細胞(CHO)併檢測熒光信號.轉染後細胞狀態良好,24 h後髮現,在倒置熒光顯微鏡下均可看到不同彊度的綠色熒光信號,且熒光信號隨時間的延長而增彊,其中轉染pAcGFP1-AI後的熒光信號彊度最彊.以上結果錶明,牙鲆堿性燐痠酶基因5′調控區和第一箇內含子序列均具有啟動子活性,且第一內含子與5′調控區存在協同效應,兩者協同能增彊基因的錶達.為瞭解甲狀腺激素T3對調控序列啟動子活性的調節作用,用不同濃度的T3處理轉染的CHO細胞,24 h後髮現加入50、75和100 nM的T3都增彊瞭綠色熒光蛋白的錶達,而且信號彊度隨T3濃度的增加而增彊.這錶明甲狀腺激素T3對牙鲆堿性燐痠酶基因調控序列的啟動子活性有一定的增彊作用.本研究為深入闡明牙鲆堿性燐痠酶基因轉錄錶達的分子機製提供瞭實驗依據.
위분석아평감성린산매기인5'조공구화제일내함자조공서렬적공능,본연구운용DNA중조기술장PCR확증득도적아평감성린산매기인적5′조공구서렬、제일내함자서렬급5′조공구화제일내함자천련서렬분별삽입계동자결실적증강형록색형광단백표체재체pAcGFP1-1중,득도pAcGFP1-5′ALP、pAcGFP1-Intron1화pAcGFP1-AI보고기인표체재체.통과지질체개도중조질립전염중국창서란소세포(CHO)병검측형광신호.전염후세포상태량호,24 h후발현,재도치형광현미경하균가간도불동강도적록색형광신호,차형광신호수시간적연장이증강,기중전염pAcGFP1-AI후적형광신호강도최강.이상결과표명,아평감성린산매기인5′조공구화제일개내함자서렬균구유계동자활성,차제일내함자여5′조공구존재협동효응,량자협동능증강기인적표체.위료해갑상선격소T3대조공서렬계동자활성적조절작용,용불동농도적T3처리전염적CHO세포,24 h후발현가입50、75화100 nM적T3도증강료록색형광단백적표체,이차신호강도수T3농도적증가이증강.저표명갑상선격소T3대아평감성린산매기인조공서렬적계동자활성유일정적증강작용.본연구위심입천명아평감성린산매기인전록표체적분자궤제제공료실험의거.
