CAJ | 학술논문

先将猪细小病毒(PPV)SC-1株VP2基因扩增产物克隆到pMD18-T载体构建质粒pMD-VP2;设计两对引物(分别引入Hind Ⅲ和Sac Ⅰ两个酶切位点)扩增猪圆环病毒二型(PCV2)SC株ORF2基因,构建了pMD-ORF2.A和pMD-ORF2.B两质粒;经相应内切酶酶切后回收目的片段,插入PPV SC-1株VP2基因的Hind Ⅲ和Sac Ⅰ两个特异限制酶切位点处(分别对应于PPV VP2蛋白N端和C端1/3处),得到重组质粒pPVP2-ORF2.A和pPVP2-ORF2.B.经鉴定后的质粒pPVP2-ORF2.A和pPVP2-ORF2.B用Kpn Ⅰ、BamH Ⅰ和ApaL Ⅰ三酶切,回收含VP2和ORF2基因的目的片段克隆至真核表达载体(pEGFP-C1),得到重组质粒pEGFP.VO.A和pEGFP.VO.B.脂质体法转染重组质粒于Cos7细胞后,采用荧光显微镜和电镜观察基因表达情况,结果仅在转染pEGFP.VO.A的样品中观察到了病毒样颗粒(VLPs).纯化VLPs免疫小鼠,结果显不能产生较好的细胞免疫和针对PPV和PCV2的特异性体液免疫,该结果表明研究中获得了PCV VP1-PCV2ORF2重组VLPs,同时也揭示PPV VPLs的N端1/3适于外源蛋白插入构建重组VLPs
선장저세소병독(PPV)SC-1주VP2기인확증산물극륭도pMD18-T재체구건질립pMD-VP2;설계량대인물(분별인입Hind Ⅲ화Sac Ⅰ량개매절위점)확증저원배병독이형(PCV2)SC주ORF2기인,구건료pMD-ORF2.A화pMD-ORF2.B량질립;경상응내절매매절후회수목적편단,삽입PPV SC-1주VP2기인적Hind Ⅲ화Sac Ⅰ량개특이한제매절위점처(분별대응우PPV VP2단백N단화C단1/3처),득도중조질립pPVP2-ORF2.A화pPVP2-ORF2.B.경감정후적질립pPVP2-ORF2.A화pPVP2-ORF2.B용Kpn Ⅰ、BamH Ⅰ화ApaL Ⅰ삼매절,회수함VP2화ORF2기인적목적편단극륭지진핵표체재체(pEGFP-C1),득도중조질립pEGFP.VO.A화pEGFP.VO.B.지질체법전염중조질립우Cos7세포후,채용형광현미경화전경관찰기인표체정황,결과부재전염pEGFP.VO.A적양품중관찰도료병독양과립(VLPs).순화VLPs면역소서,결과현불능산생교호적세포면역화침대PPV화PCV2적특이성체액면역,해결과표명연구중획득료PCV VP1-PCV2ORF2중조VLPs,동시야게시PPV VPLs적N단1/3괄우외원단백삽입구건중조VLPs