实验动物科学
實驗動物科學
실험동물과학
LABORATORY ANIMAL SCIENCE
2010年
4期
6-10
,共5页
李梓%张烨%唐启慧%陈禹宝%于在江%辛丽%陈永坤%陈清轩%舒跃龙
李梓%張燁%唐啟慧%陳禹寶%于在江%辛麗%陳永坤%陳清軒%舒躍龍
리재%장엽%당계혜%진우보%우재강%신려%진영곤%진청헌%서약룡
流感病毒H3N2%血凝素%神经氨酸酶%酵母菌%表达
流感病毒H3N2%血凝素%神經氨痠酶%酵母菌%錶達
류감병독H3N2%혈응소%신경안산매%효모균%표체
目的 克隆、表达和鉴定流感病毒H3N2血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础.方法 在成功克隆流感病毒H3N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pMET A上,构建了重组表达质粒pMET A/HA(52 bp～1549 bp)、pMET A/NA(121 bp～1 260 bp),电转化真核酵母菌pMAD16,甲醇诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法 检测其抗原性.结果 重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示蛋白表达后形成了二聚体,蛋白纯度占总蛋白的95%以上,ELlsA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性.结论 本研究成功克隆和表达了流感病毒H3N2 HA、NA基因序列,为流感病毒H3N2诊断试剂和疫苗开发等进一步研究奠定了基础.
目的 剋隆、錶達和鑒定流感病毒H3N2血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神經氨痠酶基因(neuramidinase,NA)序列,為製備抗體和基因工程疫苗打下基礎.方法 在成功剋隆流感病毒H3N2全長HA、NA基因併測序的基礎上,將部分基因序列剋隆到錶達載體pMET A上,構建瞭重組錶達質粒pMET A/HA(52 bp～1549 bp)、pMET A/NA(121 bp～1 260 bp),電轉化真覈酵母菌pMAD16,甲醇誘導錶達,利用Ni2+親和層析柱對重組蛋白進行純化,併用Western Blotting和ELISA方法 檢測其抗原性.結果 重組蛋白在酵母菌中可以高效錶達,SDS-PAGE顯示蛋白錶達後形成瞭二聚體,蛋白純度佔總蛋白的95%以上,ELlsA和Western Blotting實驗證實,重組蛋白具有良好的抗原性.結論 本研究成功剋隆和錶達瞭流感病毒H3N2 HA、NA基因序列,為流感病毒H3N2診斷試劑和疫苗開髮等進一步研究奠定瞭基礎.
목적 극륭、표체화감정류감병독H3N2혈응소기인(hemagglutinin,HA)화신경안산매기인(neuramidinase,NA)서렬,위제비항체화기인공정역묘타하기출.방법 재성공극륭류감병독H3N2전장HA、NA기인병측서적기출상,장부분기인서렬극륭도표체재체pMET A상,구건료중조표체질립pMET A/HA(52 bp～1549 bp)、pMET A/NA(121 bp～1 260 bp),전전화진핵효모균pMAD16,갑순유도표체,이용Ni2+친화층석주대중조단백진행순화,병용Western Blotting화ELISA방법 검측기항원성.결과 중조단백재효모균중가이고효표체,SDS-PAGE현시단백표체후형성료이취체,단백순도점총단백적95%이상,ELlsA화Western Blotting실험증실,중조단백구유량호적항원성.결론 본연구성공극륭화표체료류감병독H3N2 HA、NA기인서렬,위류감병독H3N2진단시제화역묘개발등진일보연구전정료기출.
