CAJ | 학술논문

目的探讨放射线诱导Egr-1基因启动子调控腺病毒介导的Smad7基因在小鼠肺内表达的规律性、其表达的细胞内定位及小鼠耐受性.方法将Egr-1基因启动子的放射敏感元件和Smad7 cDNA包装到复制缺陷型腺病毒内,制备成AD.Egr-Smad7.120只C57BL/6J小鼠随机分组进入实验,每组6只.小鼠气管内给药,24 h后单次全胸放射.(1)66只分为11组:生理盐水组、AD.Egr-Smad7及未包装Egr-Smad7腺病毒(各分5个不同病毒滴度)组,观察给药后呼吸困难、紫绀情况及72 h内死亡情况,研究重组腺病毒滴度与小鼠急性耐受性关系.(2)36只分为6组:空白对照(C)组、单纯放射(R)组、AD.Egr-Smad7未放射(RA)组、AD.Egr-Smad7放射(RAR)组、未包装Egr-Smad7病毒未放射(AV)组及未包装Egr-Smad7病毒放射(AVR)组,放射8 Gy,5 h后免疫组织化学法检测外源性Smad7基因肺内表达的细胞内定位.(3)168只分为28组:C组、R组、RA组、RAR组、AV组及AVR组(各组按照腺病毒滴度又分为1×108、5×108、1×109 pfu/0.1 ml组,按照放射后时间又分为6 h及9 h组),放射8 Gy,研究重组腺病毒滴度与外源性Smad7基因肺内表达的关系.(4)324只分为54组:C组、R组、RA组、RAR组、AV组及AVR组(各组按照射后时间又分为放射后0、1、2、3、5、7、9、12及15 h组),放射8 Gy,研究照射后不同时间Smad7基因肺内表达的时效关系.(5)126只分为21组:C组、R组、RA组、RAR组、AV组及AVR组(各放射组按放射剂量又分为5、8、10、12、15及20 Gy组),照射后5 h研究Smad7基因肺内表达与放射剂量的关系.采用Western印迹法检测小鼠肺组织Smad7蛋白表达.结果重组腺病毒滴度在109pfu及以下时,小鼠可安全耐受,各组6只均存活,而5×109 pfu及以上组小鼠5只以上死亡.AVR组外源性Smad7基因在肺泡上皮细胞、血管内皮细胞及细支气管上皮细胞胞浆内均有明显表达,而各对照组未见表达.外源性Smad7基因表达随重组腺病毒滴度升高而增加(P＜0.01);单次放射0～12 Gy间其表达随放射剂量升高而增加,15 Gy时下降;放射后2～9 h其表达量最高(P＜0.05),而后降低,15 h降至接近正常水平.结论重组腺病毒滴度在109pfu及以下时,小鼠可安全耐受.以腺病毒为载体,辐射诱导Egr-1启动子能够调控外源性Smad7基因在小鼠肺组织各种细胞胞质内广泛表达,外源性Smad7基因表达随重组病毒滴度升高而增加,并与放射剂量及放射后间隔时间有关. 目的探討放射線誘導Egr-1基因啟動子調控腺病毒介導的Smad7基因在小鼠肺內錶達的規律性、其錶達的細胞內定位及小鼠耐受性.方法將Egr-1基因啟動子的放射敏感元件和Smad7 cDNA包裝到複製缺陷型腺病毒內,製備成AD.Egr-Smad7.120隻C57BL/6J小鼠隨機分組進入實驗,每組6隻.小鼠氣管內給藥,24 h後單次全胸放射.(1)66隻分為11組:生理鹽水組、AD.Egr-Smad7及未包裝Egr-Smad7腺病毒(各分5箇不同病毒滴度)組,觀察給藥後呼吸睏難、紫紺情況及72 h內死亡情況,研究重組腺病毒滴度與小鼠急性耐受性關繫.(2)36隻分為6組:空白對照(C)組、單純放射(R)組、AD.Egr-Smad7未放射(RA)組、AD.Egr-Smad7放射(RAR)組、未包裝Egr-Smad7病毒未放射(AV)組及未包裝Egr-Smad7病毒放射(AVR)組,放射8 Gy,5 h後免疫組織化學法檢測外源性Smad7基因肺內錶達的細胞內定位.(3)168隻分為28組:C組、R組、RA組、RAR組、AV組及AVR組(各組按照腺病毒滴度又分為1×108、5×108、1×109 pfu/0.1 ml組,按照放射後時間又分為6 h及9 h組),放射8 Gy,研究重組腺病毒滴度與外源性Smad7基因肺內錶達的關繫.(4)324隻分為54組:C組、R組、RA組、RAR組、AV組及AVR組(各組按照射後時間又分為放射後0、1、2、3、5、7、9、12及15 h組),放射8 Gy,研究照射後不同時間Smad7基因肺內錶達的時效關繫.(5)126隻分為21組:C組、R組、RA組、RAR組、AV組及AVR組(各放射組按放射劑量又分為5、8、10、12、15及20 Gy組),照射後5 h研究Smad7基因肺內錶達與放射劑量的關繫.採用Western印跡法檢測小鼠肺組織Smad7蛋白錶達.結果重組腺病毒滴度在109pfu及以下時,小鼠可安全耐受,各組6隻均存活,而5×109 pfu及以上組小鼠5隻以上死亡.AVR組外源性Smad7基因在肺泡上皮細胞、血管內皮細胞及細支氣管上皮細胞胞漿內均有明顯錶達,而各對照組未見錶達.外源性Smad7基因錶達隨重組腺病毒滴度升高而增加(P＜0.01);單次放射0～12 Gy間其錶達隨放射劑量升高而增加,15 Gy時下降;放射後2～9 h其錶達量最高(P＜0.05),而後降低,15 h降至接近正常水平.結論重組腺病毒滴度在109pfu及以下時,小鼠可安全耐受.以腺病毒為載體,輻射誘導Egr-1啟動子能夠調控外源性Smad7基因在小鼠肺組織各種細胞胞質內廣汎錶達,外源性Smad7基因錶達隨重組病毒滴度升高而增加,併與放射劑量及放射後間隔時間有關.
목적탐토방사선유도Egr-1기인계동자조공선병독개도적Smad7기인재소서폐내표체적규률성、기표체적세포내정위급소서내수성.방법장Egr-1기인계동자적방사민감원건화Smad7 cDNA포장도복제결함형선병독내,제비성AD.Egr-Smad7.120지C57BL/6J소서수궤분조진입실험,매조6지.소서기관내급약,24 h후단차전흉방사.(1)66지분위11조:생리염수조、AD.Egr-Smad7급미포장Egr-Smad7선병독(각분5개불동병독적도)조,관찰급약후호흡곤난、자감정황급72 h내사망정황,연구중조선병독적도여소서급성내수성관계.(2)36지분위6조:공백대조(C)조、단순방사(R)조、AD.Egr-Smad7미방사(RA)조、AD.Egr-Smad7방사(RAR)조、미포장Egr-Smad7병독미방사(AV)조급미포장Egr-Smad7병독방사(AVR)조,방사8 Gy,5 h후면역조직화학법검측외원성Smad7기인폐내표체적세포내정위.(3)168지분위28조:C조、R조、RA조、RAR조、AV조급AVR조(각조안조선병독적도우분위1×108、5×108、1×109 pfu/0.1 ml조,안조방사후시간우분위6 h급9 h조),방사8 Gy,연구중조선병독적도여외원성Smad7기인폐내표체적관계.(4)324지분위54조:C조、R조、RA조、RAR조、AV조급AVR조(각조안조사후시간우분위방사후0、1、2、3、5、7、9、12급15 h조),방사8 Gy,연구조사후불동시간Smad7기인폐내표체적시효관계.(5)126지분위21조:C조、R조、RA조、RAR조、AV조급AVR조(각방사조안방사제량우분위5、8、10、12、15급20 Gy조),조사후5 h연구Smad7기인폐내표체여방사제량적관계.채용Western인적법검측소서폐조직Smad7단백표체.결과중조선병독적도재109pfu급이하시,소서가안전내수,각조6지균존활,이5×109 pfu급이상조소서5지이상사망.AVR조외원성Smad7기인재폐포상피세포、혈관내피세포급세지기관상피세포포장내균유명현표체,이각대조조미견표체.외원성Smad7기인표체수중조선병독적도승고이증가(P＜0.01);단차방사0～12 Gy간기표체수방사제량승고이증가,15 Gy시하강;방사후2～9 h기표체량최고(P＜0.05),이후강저,15 h강지접근정상수평.결론중조선병독적도재109pfu급이하시,소서가안전내수.이선병독위재체,복사유도Egr-1계동자능구조공외원성Smad7기인재소서폐조직각충세포포질내엄범표체,외원성Smad7기인표체수중조병독적도승고이증가,병여방사제량급방사후간격시간유관.