CAJ | 학술논문

利用所构建的含新霉素抗性(Neor)基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双标记选择载体, 通过电穿孔的方法, 分别转染了牛胎儿成纤维细胞、胎儿输卵管上皮细胞、胎儿卵巢上皮细胞、颗粒细胞, 经过800 ?g/mL的G418筛选14 d后, 均获得了阳性细胞株. 分别以未转基因牛颗粒细胞和4种细胞系的转基因细胞为核供体, 进行了牛的体细胞核移植. 结果表明: (ⅰ)转基因与未转基因牛颗粒细胞的重组胚的囊胚发育率(44.6% vs 42.8%)、移植妊娠率(19% vs 25%)差异不显著(P＞0.05); (ⅱ)比较4种类型转基因细胞的重组胚的囊胚发育率, 发现胎儿输卵管上皮细胞(49.1%)和颗粒细胞(44.6%)最高, 牛胎儿成纤维细胞(37.2%)次之, 胎儿卵巢上皮细胞的重组胚囊胚发育率(22.5%)最低, 三者之间差异显著(P＜0.05). 以上结果显示, 供体细胞的转基因与否对牛克隆胚胎的体外和体内早期发育影响不明显; 通过体细胞核移植技术, 牛胎儿输卵管上皮细胞和颗粒细胞可以有效地生产牛转基因囊胚, 并且绿色荧光蛋白作为一种无毒性作用的筛选标记, 可用于转基因胚胎的筛选.
이용소구건적함신매소항성(Neor)기인화록색형광단백(GFP)기인적쌍표기선택재체, 통과전천공적방법, 분별전염료우태인성섬유세포、태인수란관상피세포、태인란소상피세포、과립세포, 경과800 ?g/mL적G418사선14 d후, 균획득료양성세포주. 분별이미전기인우과립세포화4충세포계적전기인세포위핵공체, 진행료우적체세포핵이식. 결과표명: (ⅰ)전기인여미전기인우과립세포적중조배적낭배발육솔(44.6% vs 42.8%)、이식임신솔(19% vs 25%)차이불현저(P＞0.05); (ⅱ)비교4충류형전기인세포적중조배적낭배발육솔, 발현태인수란관상피세포(49.1%)화과립세포(44.6%)최고, 우태인성섬유세포(37.2%)차지, 태인란소상피세포적중조배낭배발육솔(22.5%)최저, 삼자지간차이현저(P＜0.05). 이상결과현시, 공체세포적전기인여부대우극륭배태적체외화체내조기발육영향불명현; 통과체세포핵이식기술, 우태인수란관상피세포화과립세포가이유효지생산우전기인낭배, 병차록색형광단백작위일충무독성작용적사선표기, 가용우전기인배태적사선.