植物学报
植物學報
식물학보
ACTA BOTANICA SINICA
2003年
7期
770-773
,共4页
烟草花叶病毒%农杆菌接种法%基因表达
煙草花葉病毒%農桿菌接種法%基因錶達
연초화협병독%농간균접충법%기인표체
tobacco mosaic virus%agroinoculation%gene expression
烟草花叶病毒(TMV)表达载体30B是一个目前广泛应用的植物病毒表达载体,但用其生产外源蛋白时,必须先将它体外转录成RNA,才能被用来接种宿主植物.由于RNA体外转录费用昂贵、操作复杂,因此限制了30B表达载体的进一步应用.针对这一不足,我们用农杆菌接种法(agroinoculation)接种该病毒载体,即将30B cDNA置于花椰菜花叶病毒(CaMV)的35S启动子和终止子之间,再将整个表达框架插入到农杆菌T-DNA的左边界和右边界之内,构建成质粒p35S-30B,将转入该质粒的农杆菌注射到植物的叶片中,30B cDNA随T-DNA进入植物细胞后,被转录成可自我复制的RNA形式,进而发生系统侵染.为了检测此接种方式的可行性,绿色荧光蛋白(GFP)报告基因被克隆到p35S-30B中,构建成p35S-30B::GFP,用含有该质粒的农杆菌进行注射操作.证实该病毒载体可通过简便的农杆菌接种法侵染Nicotiana benthamiana,在被接种植物的系统叶中,GFP的表达量可占植物总可溶蛋白的5.2%.
煙草花葉病毒(TMV)錶達載體30B是一箇目前廣汎應用的植物病毒錶達載體,但用其生產外源蛋白時,必鬚先將它體外轉錄成RNA,纔能被用來接種宿主植物.由于RNA體外轉錄費用昂貴、操作複雜,因此限製瞭30B錶達載體的進一步應用.針對這一不足,我們用農桿菌接種法(agroinoculation)接種該病毒載體,即將30B cDNA置于花椰菜花葉病毒(CaMV)的35S啟動子和終止子之間,再將整箇錶達框架插入到農桿菌T-DNA的左邊界和右邊界之內,構建成質粒p35S-30B,將轉入該質粒的農桿菌註射到植物的葉片中,30B cDNA隨T-DNA進入植物細胞後,被轉錄成可自我複製的RNA形式,進而髮生繫統侵染.為瞭檢測此接種方式的可行性,綠色熒光蛋白(GFP)報告基因被剋隆到p35S-30B中,構建成p35S-30B::GFP,用含有該質粒的農桿菌進行註射操作.證實該病毒載體可通過簡便的農桿菌接種法侵染Nicotiana benthamiana,在被接種植物的繫統葉中,GFP的錶達量可佔植物總可溶蛋白的5.2%.
연초화협병독(TMV)표체재체30B시일개목전엄범응용적식물병독표체재체,단용기생산외원단백시,필수선장타체외전록성RNA,재능피용래접충숙주식물.유우RNA체외전록비용앙귀、조작복잡,인차한제료30B표체재체적진일보응용.침대저일불족,아문용농간균접충법(agroinoculation)접충해병독재체,즉장30B cDNA치우화야채화협병독(CaMV)적35S계동자화종지자지간,재장정개표체광가삽입도농간균T-DNA적좌변계화우변계지내,구건성질립p35S-30B,장전입해질립적농간균주사도식물적협편중,30B cDNA수T-DNA진입식물세포후,피전록성가자아복제적RNA형식,진이발생계통침염.위료검측차접충방식적가행성,록색형광단백(GFP)보고기인피극륭도p35S-30B중,구건성p35S-30B::GFP,용함유해질립적농간균진행주사조작.증실해병독재체가통과간편적농간균접충법침염Nicotiana benthamiana,재피접충식물적계통협중,GFP적표체량가점식물총가용단백적5.2%.
