中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2006年
6期
1-5
,共5页
赵娟%何冰%江汉民%程秀玮%俞新大
趙娟%何冰%江漢民%程秀瑋%俞新大
조연%하빙%강한민%정수위%유신대
人β神经生长因子%基因克隆%表达%纯化%生物活性
人β神經生長因子%基因剋隆%錶達%純化%生物活性
인β신경생장인자%기인극륭%표체%순화%생물활성
从人胎盘组织中提取总DNA,经PCR扩增编码人β神经生长因子(β-NGF)成熟肽的基因,并克隆到大肠杆菌表达载体pET15b中.重组质粒pET15b-NGF经测序与报道的完全一致.重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,经IPTG诱导表达得到16kDa的目的蛋白带,与预期的大小一致,NGF表达量约占全菌总蛋白的25%.经过亲和层析柱(Ni2+-charged IDA his-bind column)纯化后得到了单一的NGF蛋白条带,蛋白纯度可达90%以上,从每升表达菌液中可以得到4.56mgNGF.表达产物的Western印迹鉴定结果显示:重组人神经生长因子能与兔抗人β-NGF的多克隆抗体发生特异性结合反应,在16kDa处出现单一的条带,表明诱导表达的重组NGF具有免疫学活性.鸡胚背根神经节感觉神经元鉴定试验表明,表达的重组NGF具有良好的生物学活性.
從人胎盤組織中提取總DNA,經PCR擴增編碼人β神經生長因子(β-NGF)成熟肽的基因,併剋隆到大腸桿菌錶達載體pET15b中.重組質粒pET15b-NGF經測序與報道的完全一緻.重組質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3)pLysS,經IPTG誘導錶達得到16kDa的目的蛋白帶,與預期的大小一緻,NGF錶達量約佔全菌總蛋白的25%.經過親和層析柱(Ni2+-charged IDA his-bind column)純化後得到瞭單一的NGF蛋白條帶,蛋白純度可達90%以上,從每升錶達菌液中可以得到4.56mgNGF.錶達產物的Western印跡鑒定結果顯示:重組人神經生長因子能與兔抗人β-NGF的多剋隆抗體髮生特異性結閤反應,在16kDa處齣現單一的條帶,錶明誘導錶達的重組NGF具有免疫學活性.鷄胚揹根神經節感覺神經元鑒定試驗錶明,錶達的重組NGF具有良好的生物學活性.
종인태반조직중제취총DNA,경PCR확증편마인β신경생장인자(β-NGF)성숙태적기인,병극륭도대장간균표체재체pET15b중.중조질립pET15b-NGF경측서여보도적완전일치.중조질립전화대장간균BL21(DE3)pLysS,경IPTG유도표체득도16kDa적목적단백대,여예기적대소일치,NGF표체량약점전균총단백적25%.경과친화층석주(Ni2+-charged IDA his-bind column)순화후득도료단일적NGF단백조대,단백순도가체90%이상,종매승표체균액중가이득도4.56mgNGF.표체산물적Western인적감정결과현시:중조인신경생장인자능여토항인β-NGF적다극륭항체발생특이성결합반응,재16kDa처출현단일적조대,표명유도표체적중조NGF구유면역학활성.계배배근신경절감각신경원감정시험표명,표체적중조NGF구유량호적생물학활성.
