生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2007年
2期
124-127,150
,共5页
邹少兰%洪解放%刘成%张敏华
鄒少蘭%洪解放%劉成%張敏華
추소란%홍해방%류성%장민화
重组工程%空隙修复%捕捉DNA
重組工程%空隙脩複%捕捉DNA
중조공정%공극수복%포착DNA
重组工程(recombineering)是近几年来兴起的一种基于体内同源重组的、新型的遗传工程技术.作为重组工程应用方式之一的空隙修复(gap-repair),是一种捕捉和克隆目的DNA的方法,具有操作简单、步骤少,没有突变、保真度高,不受酶切位点限制等等优点.以pACYC184为模板,PCR扩增含p15A复制子、氯霉素抗性基因和对S.cerevisiaeALD4基因同源臂的线性片段,与酵母染色体DNA共同电击转化诱导型表达了λ噬菌体重组酶活性的大肠杆菌BW25113(pKD46)感受态细胞,通过空隙修复方式,成功地从酵母染色体DNA直接捕捉到大小为1016 bp的ALD4基因部分区段,得到3188 bp的重组质粒pACYC184-ALD4.为进一步掌握和充分利用该技术直接捕捉更大片段基因打下了基础.
重組工程(recombineering)是近幾年來興起的一種基于體內同源重組的、新型的遺傳工程技術.作為重組工程應用方式之一的空隙脩複(gap-repair),是一種捕捉和剋隆目的DNA的方法,具有操作簡單、步驟少,沒有突變、保真度高,不受酶切位點限製等等優點.以pACYC184為模闆,PCR擴增含p15A複製子、氯黴素抗性基因和對S.cerevisiaeALD4基因同源臂的線性片段,與酵母染色體DNA共同電擊轉化誘導型錶達瞭λ噬菌體重組酶活性的大腸桿菌BW25113(pKD46)感受態細胞,通過空隙脩複方式,成功地從酵母染色體DNA直接捕捉到大小為1016 bp的ALD4基因部分區段,得到3188 bp的重組質粒pACYC184-ALD4.為進一步掌握和充分利用該技術直接捕捉更大片段基因打下瞭基礎.
중조공정(recombineering)시근궤년래흥기적일충기우체내동원중조적、신형적유전공정기술.작위중조공정응용방식지일적공극수복(gap-repair),시일충포착화극륭목적DNA적방법,구유조작간단、보취소,몰유돌변、보진도고,불수매절위점한제등등우점.이pACYC184위모판,PCR확증함p15A복제자、록매소항성기인화대S.cerevisiaeALD4기인동원비적선성편단,여효모염색체DNA공동전격전화유도형표체료λ서균체중조매활성적대장간균BW25113(pKD46)감수태세포,통과공극수복방식,성공지종효모염색체DNA직접포착도대소위1016 bp적ALD4기인부분구단,득도3188 bp적중조질립pACYC184-ALD4.위진일보장악화충분이용해기술직접포착경대편단기인타하료기출.
