中国兽医科学
中國獸醫科學
중국수의과학
VETERINARY SCIENCE IN CHINA
2009年
3期
189-195
,共7页
赵娜%田宏%吴锦艳%祁燕蓉%满自萍%尚佑军%何生虎%刘湘涛
趙娜%田宏%吳錦豔%祁燕蓉%滿自萍%尚祐軍%何生虎%劉湘濤
조나%전굉%오금염%기연용%만자평%상우군%하생호%류상도
猪生殖与呼吸综合征病毒%ORF3基因%ORF5基因%克隆%杆状病毒表达载体
豬生殖與呼吸綜閤徵病毒%ORF3基因%ORF5基因%剋隆%桿狀病毒錶達載體
저생식여호흡종합정병독%ORF3기인%ORF5기인%극륭%간상병독표체재체
根据GenBank中猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中国代表株CH-1a的基因组序列,设计包含完整ORF3、ORF5基因序列的2对特异引物,利用RT-PCR技术扩增PRRSV兰州分离株(Lanzhou株)的ORF3和ORF5基因,并对其进行序列测定,同时与已发表的13株PRRSV进行同源性比较.将扩增的PRRSV Lanzhou株ORF3、ORF5基因分别克隆到杆状病毒表达载体pFastBacHTA上,将经酶切及测序鉴定的阳性重组质粒pFastBacHTA-ORF3、pFastBaeHTA-ORF5分别转化到DH10Bac感受态细胞.结果显示,ORF3、ORF5基因长度分别为765 bp、603 bp,发现核苷酸的同源性分别为88.0%～99.2%、87.3%～99.0%,获得了重组转座子rBacmid-ORF3、rBacmid-ORF5.
根據GenBank中豬生殖與呼吸綜閤徵病毒(PRRSV)中國代錶株CH-1a的基因組序列,設計包含完整ORF3、ORF5基因序列的2對特異引物,利用RT-PCR技術擴增PRRSV蘭州分離株(Lanzhou株)的ORF3和ORF5基因,併對其進行序列測定,同時與已髮錶的13株PRRSV進行同源性比較.將擴增的PRRSV Lanzhou株ORF3、ORF5基因分彆剋隆到桿狀病毒錶達載體pFastBacHTA上,將經酶切及測序鑒定的暘性重組質粒pFastBacHTA-ORF3、pFastBaeHTA-ORF5分彆轉化到DH10Bac感受態細胞.結果顯示,ORF3、ORF5基因長度分彆為765 bp、603 bp,髮現覈苷痠的同源性分彆為88.0%～99.2%、87.3%～99.0%,穫得瞭重組轉座子rBacmid-ORF3、rBacmid-ORF5.
근거GenBank중저생식여호흡종합정병독(PRRSV)중국대표주CH-1a적기인조서렬,설계포함완정ORF3、ORF5기인서렬적2대특이인물,이용RT-PCR기술확증PRRSV란주분리주(Lanzhou주)적ORF3화ORF5기인,병대기진행서렬측정,동시여이발표적13주PRRSV진행동원성비교.장확증적PRRSV Lanzhou주ORF3、ORF5기인분별극륭도간상병독표체재체pFastBacHTA상,장경매절급측서감정적양성중조질립pFastBacHTA-ORF3、pFastBaeHTA-ORF5분별전화도DH10Bac감수태세포.결과현시,ORF3、ORF5기인장도분별위765 bp、603 bp,발현핵감산적동원성분별위88.0%～99.2%、87.3%～99.0%,획득료중조전좌자rBacmid-ORF3、rBacmid-ORF5.
