临床与实验病理学杂志
臨床與實驗病理學雜誌
림상여실험병이학잡지
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL AND EXPERIMENTAL PATHOLOGY
2010年
5期
590-593
,共4页
张惠丹%任辉%王晓楠%方瑾
張惠丹%任輝%王曉楠%方瑾
장혜단%임휘%왕효남%방근
甲醛固定%石蜡包埋组织%DNA提取%聚合酶链式反应(PCR)
甲醛固定%石蠟包埋組織%DNA提取%聚閤酶鏈式反應(PCR)
갑철고정%석사포매조직%DNA제취%취합매련식반응(PCR)
目的 建立从甲醛固定石蜡包埋组织中高效、快速提取基因组DNA的方法.方法 将一片10 μm厚石蜡包埋大肠癌组织切片直接浸入150 μl消化液中,56 ℃孵育0.5 h、1 h和2 h,灭活蛋白酶K后离心取上清即为DNA提取物.琼脂糖凝胶电泳检测所提取DNA的片段分布,紫外分光光度法测定DNA的产量及纯度.以提取的DNA为模板,PCR扩增不同长度产物片段并进行产物的直接测序以评价提取方法.结果 该提取方法能够获得较长片段的基因组DNA,从一片10 μm厚石蜡切片中即可获得大约60 μg的DNA,在0.5 h消化条件下获取的模板DNA,即可实现对152 bp、293 bp、392 bp和541 bp等4种不同片段的100%扩增,1 h消化组的PCR产物可直接用于DNA测序.结论 建立了一种简单、快速地从甲醛固定石蜡包埋组织中提取DNA的方法,只需一步消化即可获得满足普通PCR及测序需要的基因组DNA.
目的 建立從甲醛固定石蠟包埋組織中高效、快速提取基因組DNA的方法.方法 將一片10 μm厚石蠟包埋大腸癌組織切片直接浸入150 μl消化液中,56 ℃孵育0.5 h、1 h和2 h,滅活蛋白酶K後離心取上清即為DNA提取物.瓊脂糖凝膠電泳檢測所提取DNA的片段分佈,紫外分光光度法測定DNA的產量及純度.以提取的DNA為模闆,PCR擴增不同長度產物片段併進行產物的直接測序以評價提取方法.結果 該提取方法能夠穫得較長片段的基因組DNA,從一片10 μm厚石蠟切片中即可穫得大約60 μg的DNA,在0.5 h消化條件下穫取的模闆DNA,即可實現對152 bp、293 bp、392 bp和541 bp等4種不同片段的100%擴增,1 h消化組的PCR產物可直接用于DNA測序.結論 建立瞭一種簡單、快速地從甲醛固定石蠟包埋組織中提取DNA的方法,隻需一步消化即可穫得滿足普通PCR及測序需要的基因組DNA.
목적 건립종갑철고정석사포매조직중고효、쾌속제취기인조DNA적방법.방법 장일편10 μm후석사포매대장암조직절편직접침입150 μl소화액중,56 ℃부육0.5 h、1 h화2 h,멸활단백매K후리심취상청즉위DNA제취물.경지당응효전영검측소제취DNA적편단분포,자외분광광도법측정DNA적산량급순도.이제취적DNA위모판,PCR확증불동장도산물편단병진행산물적직접측서이평개제취방법.결과 해제취방법능구획득교장편단적기인조DNA,종일편10 μm후석사절편중즉가획득대약60 μg적DNA,재0.5 h소화조건하획취적모판DNA,즉가실현대152 bp、293 bp、392 bp화541 bp등4충불동편단적100%확증,1 h소화조적PCR산물가직접용우DNA측서.결론 건립료일충간단、쾌속지종갑철고정석사포매조직중제취DNA적방법,지수일보소화즉가획득만족보통PCR급측서수요적기인조DNA.
