重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2011年
7期
833-836
,共4页
梁丽%雷宇%倪艳%王蜀强%彭凤英%周智%陈压西%任红
樑麗%雷宇%倪豔%王蜀彊%彭鳳英%週智%陳壓西%任紅
량려%뢰우%예염%왕촉강%팽봉영%주지%진압서%임홍
乙肝病毒%四环素%调控表达
乙肝病毒%四環素%調控錶達
을간병독%사배소%조공표체
目的:构建在同一载体中含乙肝病毒表面抗原基因(Hepatitis B virus surface gene,HBV-S)和四环素阻抑蛋白基因的双表达载体,研究在真核细胞中四环素对S基因表达的调控.方法:在双表达载体pVITRO3一个启动子后的多克隆位点插入四环素阻抑蛋白基因,用含四环素操纵子的启动子取代另一个启动子,并在其多克隆位点插入S基因,在同一载体中构建成S基因的四环素调控表达系统.用脂质体将重组质粒转染HepG2细胞,潮霉素400μg/ml进行抗性筛选,20 d形成抗性克隆,建立在四环素诱导下能稳定表达S基因的细胞系.以不同浓度的四环素(0.5、1.0、2.0、3.0 μg/ml)进行诱导,用逆转录PCR和微粒子酶免疫分析法检测S抗原的表达,以确定四环素的最佳浓度.结果:转染了重组质粒的HepG2细胞,在无四环素环境下,表达HBsAg水平极低,72 h时S/N值平均为1.57,在不同浓度的四环素诱导下,HBsAg表达量明显增加,72 h时S/N平均值分别为4.24、4.23、4.18、4.20,未发现与四环素的浓度之间有剂量关系.结论:成功构建了在同一质粒中表达HBV-S基因和四环素阻抑蛋白基因的双表达调控载体,在不同浓度四环素诱导下均有HBsAg表达,并随时间延长而表达量增高,但在同一时间点无明显差异.
目的:構建在同一載體中含乙肝病毒錶麵抗原基因(Hepatitis B virus surface gene,HBV-S)和四環素阻抑蛋白基因的雙錶達載體,研究在真覈細胞中四環素對S基因錶達的調控.方法:在雙錶達載體pVITRO3一箇啟動子後的多剋隆位點插入四環素阻抑蛋白基因,用含四環素操縱子的啟動子取代另一箇啟動子,併在其多剋隆位點插入S基因,在同一載體中構建成S基因的四環素調控錶達繫統.用脂質體將重組質粒轉染HepG2細胞,潮黴素400μg/ml進行抗性篩選,20 d形成抗性剋隆,建立在四環素誘導下能穩定錶達S基因的細胞繫.以不同濃度的四環素(0.5、1.0、2.0、3.0 μg/ml)進行誘導,用逆轉錄PCR和微粒子酶免疫分析法檢測S抗原的錶達,以確定四環素的最佳濃度.結果:轉染瞭重組質粒的HepG2細胞,在無四環素環境下,錶達HBsAg水平極低,72 h時S/N值平均為1.57,在不同濃度的四環素誘導下,HBsAg錶達量明顯增加,72 h時S/N平均值分彆為4.24、4.23、4.18、4.20,未髮現與四環素的濃度之間有劑量關繫.結論:成功構建瞭在同一質粒中錶達HBV-S基因和四環素阻抑蛋白基因的雙錶達調控載體,在不同濃度四環素誘導下均有HBsAg錶達,併隨時間延長而錶達量增高,但在同一時間點無明顯差異.
목적:구건재동일재체중함을간병독표면항원기인(Hepatitis B virus surface gene,HBV-S)화사배소조억단백기인적쌍표체재체,연구재진핵세포중사배소대S기인표체적조공.방법:재쌍표체재체pVITRO3일개계동자후적다극륭위점삽입사배소조억단백기인,용함사배소조종자적계동자취대령일개계동자,병재기다극륭위점삽입S기인,재동일재체중구건성S기인적사배소조공표체계통.용지질체장중조질립전염HepG2세포,조매소400μg/ml진행항성사선,20 d형성항성극륭,건립재사배소유도하능은정표체S기인적세포계.이불동농도적사배소(0.5、1.0、2.0、3.0 μg/ml)진행유도,용역전록PCR화미입자매면역분석법검측S항원적표체,이학정사배소적최가농도.결과:전염료중조질립적HepG2세포,재무사배소배경하,표체HBsAg수평겁저,72 h시S/N치평균위1.57,재불동농도적사배소유도하,HBsAg표체량명현증가,72 h시S/N평균치분별위4.24、4.23、4.18、4.20,미발현여사배소적농도지간유제량관계.결론:성공구건료재동일질립중표체HBV-S기인화사배소조억단백기인적쌍표체조공재체,재불동농도사배소유도하균유HBsAg표체,병수시간연장이표체량증고,단재동일시간점무명현차이.
