军事医学
軍事醫學
군사의학
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2011年
9期
681-684
,共4页
安磊%李静%金增亮%李云峰%李锦%张有志
安磊%李靜%金增亮%李雲峰%李錦%張有誌
안뢰%리정%금증량%리운봉%리금%장유지
5-羟色胺转运体(SERT)%HEK293%抗抑郁药%5-HT%细胞转染
5-羥色胺轉運體(SERT)%HEK293%抗抑鬱藥%5-HT%細胞轉染
5-간색알전운체(SERT)%HEK293%항억욱약%5-HT%세포전염
目的 建立人源5-羟色胺转运体(human serotonin transporter,hSERT)稳定表达细胞系,并对细胞系hSERT的结合活性和重摄取功能进行初步研究.方法采用脂质体转染法将hSERT转染于母细胞,即人胚胎肾(human embryo kidney,HEK)293细胞,应用抗生素G418(800 μg/ml)压力筛选,并采用RT-PCR和Western印迹法在基因和蛋白水平对HEK293-hSERT细胞系进行鉴定和稳定性验证;采用放射性配体结合实验检测其与氚标西酞普兰([3H]-citalopram)的结合活性,并检测其对[3H]5-HT的重摄取功能.结果 RT-PCR和Western印迹结果表明,所建立的HEK293-hSERT细胞系在15代内(P1,P5,P10,P15)均稳定表达hSERT;放射配体结合实验表明,HEK293-hSERT细胞系与[3H]-西酞普兰具有明显的特异性结合;并且在100 nmol/L [3H]5-HT条件下,具有明显的5-HT重摄取功能,这一作用可被10 μmol/L的氟西汀所阻断,而母细胞HEK293无此功能.结论 本研究所建立的HEK293-hSERT细胞系可稳定表达SERT,并且具有内源性SERT的结合和重摄取功能,是一种稳定表达功能性hSERT的细胞系.
目的 建立人源5-羥色胺轉運體(human serotonin transporter,hSERT)穩定錶達細胞繫,併對細胞繫hSERT的結閤活性和重攝取功能進行初步研究.方法採用脂質體轉染法將hSERT轉染于母細胞,即人胚胎腎(human embryo kidney,HEK)293細胞,應用抗生素G418(800 μg/ml)壓力篩選,併採用RT-PCR和Western印跡法在基因和蛋白水平對HEK293-hSERT細胞繫進行鑒定和穩定性驗證;採用放射性配體結閤實驗檢測其與氚標西酞普蘭([3H]-citalopram)的結閤活性,併檢測其對[3H]5-HT的重攝取功能.結果 RT-PCR和Western印跡結果錶明,所建立的HEK293-hSERT細胞繫在15代內(P1,P5,P10,P15)均穩定錶達hSERT;放射配體結閤實驗錶明,HEK293-hSERT細胞繫與[3H]-西酞普蘭具有明顯的特異性結閤;併且在100 nmol/L [3H]5-HT條件下,具有明顯的5-HT重攝取功能,這一作用可被10 μmol/L的氟西汀所阻斷,而母細胞HEK293無此功能.結論 本研究所建立的HEK293-hSERT細胞繫可穩定錶達SERT,併且具有內源性SERT的結閤和重攝取功能,是一種穩定錶達功能性hSERT的細胞繫.
목적 건립인원5-간색알전운체(human serotonin transporter,hSERT)은정표체세포계,병대세포계hSERT적결합활성화중섭취공능진행초보연구.방법채용지질체전염법장hSERT전염우모세포,즉인배태신(human embryo kidney,HEK)293세포,응용항생소G418(800 μg/ml)압력사선,병채용RT-PCR화Western인적법재기인화단백수평대HEK293-hSERT세포계진행감정화은정성험증;채용방사성배체결합실험검측기여천표서태보란([3H]-citalopram)적결합활성,병검측기대[3H]5-HT적중섭취공능.결과 RT-PCR화Western인적결과표명,소건립적HEK293-hSERT세포계재15대내(P1,P5,P10,P15)균은정표체hSERT;방사배체결합실험표명,HEK293-hSERT세포계여[3H]-서태보란구유명현적특이성결합;병차재100 nmol/L [3H]5-HT조건하,구유명현적5-HT중섭취공능,저일작용가피10 μmol/L적불서정소조단,이모세포HEK293무차공능.결론 본연구소건립적HEK293-hSERT세포계가은정표체SERT,병차구유내원성SERT적결합화중섭취공능,시일충은정표체공능성hSERT적세포계.
