中华实验和临床感染病杂志（电子版）
中華實驗和臨床感染病雜誌（電子版）
중화실험화림상감염병잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL AND CLINICAL INFECTIOUS DISEASES(ELECTRONIC VERSION)
2012年
2期
109-112
,共4页
李凌华%胡凤玉%陈万山%宋伟南%蔡卫平%唐小平
李凌華%鬍鳳玉%陳萬山%宋偉南%蔡衛平%唐小平
리릉화%호봉옥%진만산%송위남%채위평%당소평
马尔尼菲青霉菌%溶血磷脂酶%克隆%原核表达
馬爾尼菲青黴菌%溶血燐脂酶%剋隆%原覈錶達
마이니비청매균%용혈린지매%극륭%원핵표체
目的 研究马尔尼菲青霉菌(PM)溶血磷脂酶(LysoPLs)基因的克隆、表达和纯化,为研究其致病机制奠定基础.方法 采用生物信息学方法,从PM酵母相全长 cDNA 文库中识别出PMLysoPLs基因的同源序列及其全长编码区.通过PCR方法 扩增PMLysoPLs基因的编码区序列,构建原核表达载体pET 30a(+)-PMLysoPLs,经DNA 序列测定鉴定其序列,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,重组产物采用His-镍蛋白纯化柱进行纯化.结果 PMLysoPLs基因长度为991 bp,其全长编码序列长度为732 bp,编码243个氨基酸,其编码蛋白理论分子量为26.8 kDa.重组表达载体经序列测定及酶切鉴定与理论推测结果 相符.经IPTG诱导,该基因在大肠埃希菌BL-21/DE3中得到高效的可溶性上清表达,纯化后的重组蛋白分子量为25~35 kDa,其单一蛋白纯度达95%以上.结论 本研究成功构建了PMLysoPLs基因的pET 30a(+)原核重组质粒,获得的可溶性重组蛋白表达效率高,可用于进一步研究PM溶血磷脂酶的功能.
目的 研究馬爾尼菲青黴菌(PM)溶血燐脂酶(LysoPLs)基因的剋隆、錶達和純化,為研究其緻病機製奠定基礎.方法 採用生物信息學方法,從PM酵母相全長 cDNA 文庫中識彆齣PMLysoPLs基因的同源序列及其全長編碼區.通過PCR方法 擴增PMLysoPLs基因的編碼區序列,構建原覈錶達載體pET 30a(+)-PMLysoPLs,經DNA 序列測定鑒定其序列,在大腸埃希菌BL-21/DE3中用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達,重組產物採用His-鎳蛋白純化柱進行純化.結果 PMLysoPLs基因長度為991 bp,其全長編碼序列長度為732 bp,編碼243箇氨基痠,其編碼蛋白理論分子量為26.8 kDa.重組錶達載體經序列測定及酶切鑒定與理論推測結果 相符.經IPTG誘導,該基因在大腸埃希菌BL-21/DE3中得到高效的可溶性上清錶達,純化後的重組蛋白分子量為25~35 kDa,其單一蛋白純度達95%以上.結論 本研究成功構建瞭PMLysoPLs基因的pET 30a(+)原覈重組質粒,穫得的可溶性重組蛋白錶達效率高,可用于進一步研究PM溶血燐脂酶的功能.
목적 연구마이니비청매균(PM)용혈린지매(LysoPLs)기인적극륭、표체화순화,위연구기치병궤제전정기출.방법 채용생물신식학방법,종PM효모상전장 cDNA 문고중식별출PMLysoPLs기인적동원서렬급기전장편마구.통과PCR방법 확증PMLysoPLs기인적편마구서렬,구건원핵표체재체pET 30a(+)-PMLysoPLs,경DNA 서렬측정감정기서렬,재대장애희균BL-21/DE3중용이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체,중조산물채용His-얼단백순화주진행순화.결과 PMLysoPLs기인장도위991 bp,기전장편마서렬장도위732 bp,편마243개안기산,기편마단백이론분자량위26.8 kDa.중조표체재체경서렬측정급매절감정여이론추측결과 상부.경IPTG유도,해기인재대장애희균BL-21/DE3중득도고효적가용성상청표체,순화후적중조단백분자량위25~35 kDa,기단일단백순도체95%이상.결론 본연구성공구건료PMLysoPLs기인적pET 30a(+)원핵중조질립,획득적가용성중조단백표체효솔고,가용우진일보연구PM용혈린지매적공능.
