基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2012年
5期
474-480
,共7页
何林祥%孙航%吴传新%龚建平%刘杞%郭晖
何林祥%孫航%吳傳新%龔建平%劉杞%郭暉
하림상%손항%오전신%공건평%류기%곽휘
内毒素%高迁移率族蛋白B1%分子机制
內毒素%高遷移率族蛋白B1%分子機製
내독소%고천이솔족단백B1%분자궤제
目的 检测LPS刺激后小鼠腹腔巨噬细胞HMGB1和相关信号分子P38 MAPK、NF-κB、CBP的表达,探讨脓毒症时巨噬细胞表达和释放HMGB1的信号传导机制.方法 采用LPS刺激RAW264.7细胞,在不同的时间点用免疫细胞化学、激光共聚焦显微镜观察细胞内相关信号分子P38 MAPK、NF-κB、CBP的变化,ELISA检测培养上清HMGB1的含量,Real-time PCR检测培养细胞HMGB1的mRNA水平,Western blot检测胞质和胞核内HMGB1的含量.结果 随着LPs的刺激,胞质内P38 MAPK的绿色荧光逐渐增强,NF-κB的绿色荧逐渐减弱,而胞核内NF-κB绿色荧光逐渐增强,CBP的绿色荧光逐渐增强,3者均于刺激后6h达高峰.LPS刺激后12 ～48 h培养细胞胞质和上清中HMGB1蛋白含量逐渐增加,而12～24 h胞核内HMGB1含量逐渐减少,36h后又逐渐增多,各不同时间点差异具有显著性(P＜0.01)；而细胞内HMGB1 mRNA表达在LPS刺激后0～12 h无明显变化,24、36和48h明显增高,与0h相比差异有显著性(P＜0.01).结论 LPS通过依次激活巨噬细胞内信号分子P38 MAPK、NF-κB及CBP来诱导HMGB1的合成、转位和释放表达的.
目的 檢測LPS刺激後小鼠腹腔巨噬細胞HMGB1和相關信號分子P38 MAPK、NF-κB、CBP的錶達,探討膿毒癥時巨噬細胞錶達和釋放HMGB1的信號傳導機製.方法 採用LPS刺激RAW264.7細胞,在不同的時間點用免疫細胞化學、激光共聚焦顯微鏡觀察細胞內相關信號分子P38 MAPK、NF-κB、CBP的變化,ELISA檢測培養上清HMGB1的含量,Real-time PCR檢測培養細胞HMGB1的mRNA水平,Western blot檢測胞質和胞覈內HMGB1的含量.結果 隨著LPs的刺激,胞質內P38 MAPK的綠色熒光逐漸增彊,NF-κB的綠色熒逐漸減弱,而胞覈內NF-κB綠色熒光逐漸增彊,CBP的綠色熒光逐漸增彊,3者均于刺激後6h達高峰.LPS刺激後12 ～48 h培養細胞胞質和上清中HMGB1蛋白含量逐漸增加,而12～24 h胞覈內HMGB1含量逐漸減少,36h後又逐漸增多,各不同時間點差異具有顯著性(P＜0.01)；而細胞內HMGB1 mRNA錶達在LPS刺激後0～12 h無明顯變化,24、36和48h明顯增高,與0h相比差異有顯著性(P＜0.01).結論 LPS通過依次激活巨噬細胞內信號分子P38 MAPK、NF-κB及CBP來誘導HMGB1的閤成、轉位和釋放錶達的.
목적 검측LPS자격후소서복강거서세포HMGB1화상관신호분자P38 MAPK、NF-κB、CBP적표체,탐토농독증시거서세포표체화석방HMGB1적신호전도궤제.방법 채용LPS자격RAW264.7세포,재불동적시간점용면역세포화학、격광공취초현미경관찰세포내상관신호분자P38 MAPK、NF-κB、CBP적변화,ELISA검측배양상청HMGB1적함량,Real-time PCR검측배양세포HMGB1적mRNA수평,Western blot검측포질화포핵내HMGB1적함량.결과 수착LPs적자격,포질내P38 MAPK적록색형광축점증강,NF-κB적록색형축점감약,이포핵내NF-κB록색형광축점증강,CBP적록색형광축점증강,3자균우자격후6h체고봉.LPS자격후12 ～48 h배양세포포질화상청중HMGB1단백함량축점증가,이12～24 h포핵내HMGB1함량축점감소,36h후우축점증다,각불동시간점차이구유현저성(P＜0.01)；이세포내HMGB1 mRNA표체재LPS자격후0～12 h무명현변화,24、36화48h명현증고,여0h상비차이유현저성(P＜0.01).결론 LPS통과의차격활거서세포내신호분자P38 MAPK、NF-κB급CBP래유도HMGB1적합성、전위화석방표체적.
