中国综合临床
中國綜閤臨床
중국종합림상
CLINICAL MEDICINE OF CHINA
2008年
z1期
9-10
,共2页
唐建玲%唐建雄%贾隽乔%周伟芹
唐建玲%唐建雄%賈雋喬%週偉芹
당건령%당건웅%가준교%주위근
肿瘤坏死因子-α%B细胞%胰岛素受体底物-1%胰岛素抵抗
腫瘤壞死因子-α%B細胞%胰島素受體底物-1%胰島素牴抗
종류배사인자-α%B세포%이도소수체저물-1%이도소저항
目的 观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对B细胞胰岛素信号转导的影响,以期探寻TNF-α导致B细胞胰岛素抵抗的分子机制.方法 从正常SD大鼠获取胰腺,胶原酶消化及网筛过滤初步纯化胰岛,再以胰蛋白酶和DNA酶消化成单细胞悬液,用流式细胞术(FACS)对B细胞进行分选纯化,细胞于实验前1 d更换为含0.2%牛血清白蛋白(BSA)的无血清培养基培养过夜.实验组加TNF-α溶液于含0.1%BSA的PBS缓冲液10 ng/ml培养6 h和72 h.对照组加入等体积的0.1%BSA的PBS缓冲液.100 nmoL/L胰岛素行胰岛素刺激实验.结果 TNF-α轻度升高基础胰岛素受体底物1(IRS-1)酪氨酸磷酸化水平(P>0.05),但显著抑制胰岛素刺激的IRS-1酪氨酸磷酸化水平(P<0.01).作用6 h下降28%(P<0.05),作用72 h下降51%(P<0.01);TNF-α作用6 h对IRS-1表达水平无明显影响(P>0.05),作用72 h使IRS-1水平下降63%(P<0.01).TNF-α作用6 h可增高基础丝氨酸(Ser)307磷酸化水平5倍(P<0.01);胰岛素刺激可使其进一步升高,但作用72 h后Ser 307磷酸化水平恢复至基础水平,胰岛素刺激不能进一步增强其磷酸化.结论 TNF-α可抑制B细胞胰岛素介导的信号通路,从而导致B细胞胰岛素抵抗.
目的 觀察腫瘤壞死因子-α(TNF-α)對B細胞胰島素信號轉導的影響,以期探尋TNF-α導緻B細胞胰島素牴抗的分子機製.方法 從正常SD大鼠穫取胰腺,膠原酶消化及網篩過濾初步純化胰島,再以胰蛋白酶和DNA酶消化成單細胞懸液,用流式細胞術(FACS)對B細胞進行分選純化,細胞于實驗前1 d更換為含0.2%牛血清白蛋白(BSA)的無血清培養基培養過夜.實驗組加TNF-α溶液于含0.1%BSA的PBS緩遲液10 ng/ml培養6 h和72 h.對照組加入等體積的0.1%BSA的PBS緩遲液.100 nmoL/L胰島素行胰島素刺激實驗.結果 TNF-α輕度升高基礎胰島素受體底物1(IRS-1)酪氨痠燐痠化水平(P>0.05),但顯著抑製胰島素刺激的IRS-1酪氨痠燐痠化水平(P<0.01).作用6 h下降28%(P<0.05),作用72 h下降51%(P<0.01);TNF-α作用6 h對IRS-1錶達水平無明顯影響(P>0.05),作用72 h使IRS-1水平下降63%(P<0.01).TNF-α作用6 h可增高基礎絲氨痠(Ser)307燐痠化水平5倍(P<0.01);胰島素刺激可使其進一步升高,但作用72 h後Ser 307燐痠化水平恢複至基礎水平,胰島素刺激不能進一步增彊其燐痠化.結論 TNF-α可抑製B細胞胰島素介導的信號通路,從而導緻B細胞胰島素牴抗.
목적 관찰종류배사인자-α(TNF-α)대B세포이도소신호전도적영향,이기탐심TNF-α도치B세포이도소저항적분자궤제.방법 종정상SD대서획취이선,효원매소화급망사과려초보순화이도,재이이단백매화DNA매소화성단세포현액,용류식세포술(FACS)대B세포진행분선순화,세포우실험전1 d경환위함0.2%우혈청백단백(BSA)적무혈청배양기배양과야.실험조가TNF-α용액우함0.1%BSA적PBS완충액10 ng/ml배양6 h화72 h.대조조가입등체적적0.1%BSA적PBS완충액.100 nmoL/L이도소행이도소자격실험.결과 TNF-α경도승고기출이도소수체저물1(IRS-1)락안산린산화수평(P>0.05),단현저억제이도소자격적IRS-1락안산린산화수평(P<0.01).작용6 h하강28%(P<0.05),작용72 h하강51%(P<0.01);TNF-α작용6 h대IRS-1표체수평무명현영향(P>0.05),작용72 h사IRS-1수평하강63%(P<0.01).TNF-α작용6 h가증고기출사안산(Ser)307린산화수평5배(P<0.01);이도소자격가사기진일보승고,단작용72 h후Ser 307린산화수평회복지기출수평,이도소자격불능진일보증강기린산화.결론 TNF-α가억제B세포이도소개도적신호통로,종이도치B세포이도소저항.
