中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2006年
6期
498-507
,共10页
周荣荣%卫军霞%王亚辉%张亮%程京%周玉祥
週榮榮%衛軍霞%王亞輝%張亮%程京%週玉祥
주영영%위군하%왕아휘%장량%정경%주옥상
DNA微阵列%双轮RNA线性扩增%双轮体外转录%可靠性和重复性
DNA微陣列%雙輪RNA線性擴增%雙輪體外轉錄%可靠性和重複性
DNA미진렬%쌍륜RNA선성확증%쌍륜체외전록%가고성화중복성
DNA微阵列能在一次实验中检测成千上万个基因的表达情况,有助于阐明疾病发生的分子机制及发现新的诊治靶标.但常规方法需要大量RNA,因而基于T7 RNA线性扩增技术逐渐成为微阵列表达谱实验中最常用的探针制备方法.本方法将实验步骤进一步改进,增加额外的一轮体外转录,并结合Klenow酶标记技术来制备cDNA靶标和寡核苷酸芯片杂交.从纳克量级的总RNA起始,本方法和常规的RNA单轮线性扩增法相比,仍然准确地保留了约70%的基因表达信息.同一RNA样本的自身比较实验及重复实验结果也显示,该方法具有较高的可靠性和重复性.RNA双轮体外扩增法需要的起始RNA相对于常规的单轮扩增法减少了很多(10 ng甚至更少),因而非常适合分析那些只能提供微量RNA的样本.
DNA微陣列能在一次實驗中檢測成韆上萬箇基因的錶達情況,有助于闡明疾病髮生的分子機製及髮現新的診治靶標.但常規方法需要大量RNA,因而基于T7 RNA線性擴增技術逐漸成為微陣列錶達譜實驗中最常用的探針製備方法.本方法將實驗步驟進一步改進,增加額外的一輪體外轉錄,併結閤Klenow酶標記技術來製備cDNA靶標和寡覈苷痠芯片雜交.從納剋量級的總RNA起始,本方法和常規的RNA單輪線性擴增法相比,仍然準確地保留瞭約70%的基因錶達信息.同一RNA樣本的自身比較實驗及重複實驗結果也顯示,該方法具有較高的可靠性和重複性.RNA雙輪體外擴增法需要的起始RNA相對于常規的單輪擴增法減少瞭很多(10 ng甚至更少),因而非常適閤分析那些隻能提供微量RNA的樣本.
DNA미진렬능재일차실험중검측성천상만개기인적표체정황,유조우천명질병발생적분자궤제급발현신적진치파표.단상규방법수요대량RNA,인이기우T7 RNA선성확증기술축점성위미진렬표체보실험중최상용적탐침제비방법.본방법장실험보취진일보개진,증가액외적일륜체외전록,병결합Klenow매표기기술래제비cDNA파표화과핵감산심편잡교.종납극량급적총RNA기시,본방법화상규적RNA단륜선성확증법상비,잉연준학지보류료약70%적기인표체신식.동일RNA양본적자신비교실험급중복실험결과야현시,해방법구유교고적가고성화중복성.RNA쌍륜체외확증법수요적기시RNA상대우상규적단륜확증법감소료흔다(10 ng심지경소),인이비상괄합분석나사지능제공미량RNA적양본.
