中华血液学杂志
中華血液學雜誌
중화혈액학잡지
Chinese Journal of Hematology
2012年
6期
453-456
,共4页
周睿卿%龚玉萍%郭勇%单卿卿%杨曦
週睿卿%龔玉萍%郭勇%單卿卿%楊晞
주예경%공옥평%곽용%단경경%양희
基因,SCL/TAL-1%细胞系,K562%细胞分化%RNA干扰
基因,SCL/TAL-1%細胞繫,K562%細胞分化%RNA榦擾
기인,SCL/TAL-1%세포계,K562%세포분화%RNA간우
目的 通过RNA干扰技术降低SCL/TAL-1 mRNA的表达,探讨SCL/TAL-1在K562细胞红系分化中的作用.方法 以EPO诱导白血病细胞系K562细胞向红系分化为模型,将靶向SCL/TAL-1基因的特异性短发夹RNA(shRNA)慢病毒质粒pTRIP-dU3- RNAiTALh-EF1a-GFP转染K562细胞,RT-PCR检测其SCL/TAL-1和红系相关基因RhD、血型糖蛋白A(GPA,即CD253a)、CD47 mRNA表达水平变化,流式细胞术分析红系分化抗原CD71、CD253a的表达,并以空载体质粒pTRIP-dU3- RNAiluc-EF1-GFP转染的K652细胞为对照.结果 ①通过慢病毒转染系统将含SCL/TAL-1 shRNA的质粒及空载体质粒转染K562细胞48 h,绿色荧光蛋白(GFP)+细胞占总细胞的95%以上,表明感染率达到95%以上.②RT-PCR结果显示转染特异性shRNA的K562细胞SCL/TAL-1 mRNA表达水平比空载体对照明显下调(P<0.05),红系抗原CD47和RhD mRNA水平也比对照组明显下调(P<0.05),GPA有所下降,但没有CD47和RhD下降程度大.③流式细胞术检测到SCL/TAL-1低表达组红系分化抗原CD71、CD235a表达降低,表达率分别是10.4%、76.5%,而在对照组的表达率分别为94.3%、83.6%.结论 研究结果提示转录因子SCL/ TAL-1参与了红系定向分化.
目的 通過RNA榦擾技術降低SCL/TAL-1 mRNA的錶達,探討SCL/TAL-1在K562細胞紅繫分化中的作用.方法 以EPO誘導白血病細胞繫K562細胞嚮紅繫分化為模型,將靶嚮SCL/TAL-1基因的特異性短髮夾RNA(shRNA)慢病毒質粒pTRIP-dU3- RNAiTALh-EF1a-GFP轉染K562細胞,RT-PCR檢測其SCL/TAL-1和紅繫相關基因RhD、血型糖蛋白A(GPA,即CD253a)、CD47 mRNA錶達水平變化,流式細胞術分析紅繫分化抗原CD71、CD253a的錶達,併以空載體質粒pTRIP-dU3- RNAiluc-EF1-GFP轉染的K652細胞為對照.結果 ①通過慢病毒轉染繫統將含SCL/TAL-1 shRNA的質粒及空載體質粒轉染K562細胞48 h,綠色熒光蛋白(GFP)+細胞佔總細胞的95%以上,錶明感染率達到95%以上.②RT-PCR結果顯示轉染特異性shRNA的K562細胞SCL/TAL-1 mRNA錶達水平比空載體對照明顯下調(P<0.05),紅繫抗原CD47和RhD mRNA水平也比對照組明顯下調(P<0.05),GPA有所下降,但沒有CD47和RhD下降程度大.③流式細胞術檢測到SCL/TAL-1低錶達組紅繫分化抗原CD71、CD235a錶達降低,錶達率分彆是10.4%、76.5%,而在對照組的錶達率分彆為94.3%、83.6%.結論 研究結果提示轉錄因子SCL/ TAL-1參與瞭紅繫定嚮分化.
목적 통과RNA간우기술강저SCL/TAL-1 mRNA적표체,탐토SCL/TAL-1재K562세포홍계분화중적작용.방법 이EPO유도백혈병세포계K562세포향홍계분화위모형,장파향SCL/TAL-1기인적특이성단발협RNA(shRNA)만병독질립pTRIP-dU3- RNAiTALh-EF1a-GFP전염K562세포,RT-PCR검측기SCL/TAL-1화홍계상관기인RhD、혈형당단백A(GPA,즉CD253a)、CD47 mRNA표체수평변화,류식세포술분석홍계분화항원CD71、CD253a적표체,병이공재체질립pTRIP-dU3- RNAiluc-EF1-GFP전염적K652세포위대조.결과 ①통과만병독전염계통장함SCL/TAL-1 shRNA적질립급공재체질립전염K562세포48 h,록색형광단백(GFP)+세포점총세포적95%이상,표명감염솔체도95%이상.②RT-PCR결과현시전염특이성shRNA적K562세포SCL/TAL-1 mRNA표체수평비공재체대조명현하조(P<0.05),홍계항원CD47화RhD mRNA수평야비대조조명현하조(P<0.05),GPA유소하강,단몰유CD47화RhD하강정도대.③류식세포술검측도SCL/TAL-1저표체조홍계분화항원CD71、CD235a표체강저,표체솔분별시10.4%、76.5%,이재대조조적표체솔분별위94.3%、83.6%.결론 연구결과제시전록인자SCL/ TAL-1삼여료홍계정향분화.
