CAJ | 학술논문

目的观察人细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4-免疫球蛋白融合蛋白(hCTLA4-Ig)基因修饰的人骨髓间充质干细胞(hMSCs)作为种子细胞异种移植到F344大鼠体内是否成骨,探索获得骨组织工程异基因种子细胞的一种方法. 方法应用含有目的基因 hCTLA4-Ig和增强绿色荧光蛋白(EGFP)的逆转录病毒感染第1代hMSCs,应用G418筛选出抗性细胞群(hMSCs-CTLA4);用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学方法分别检测hMSCs-CTLA4中hCTLA4-Ig mRNA和蛋白质表达.用荧光激活细胞分选仪(FACS)检测hMSCs-CTLA4中表达hCTLA4-Ig蛋白的阳性率.将hMSCs-CTLA4作为种子细胞在体外构建组织工程骨并移植到F344大鼠皮下,用X线片、组织形态学、免疫组织化学方法分别观察其体内成骨状况和hCTLA4-Ig表达情况. 结果分离的hMSCs CD105表达阳性,CD34表达阴性.hMSCs-CTLA4的细胞形态呈梭形,与hMSCs比较无明显改变;倒置荧光显微镜观察见绝大多数细胞呈绿色,强阳性表达EGFP.RT-PCR、免疫细胞化学结果分别证实hMSCs-CTLA4表达hCTLA4-Ig mRNA和蛋白.FACS检测结果显示:hMSCs-CTLA4表达hCTLA4-Ig蛋白的阳性率为78.4%.本实验构建的组织工程骨,每克脱钙骨基质(DBM)上吸附、生长的细胞约(1～1.5)×106个.DBM/hMSCs-CTLA4组植入F344大鼠皮下术后2～12周均可检测到hCTLA4-Ig阳性表达细胞,8～12周出现人源性新生骨组织;而单纯DBM组与DBM/hMSCs组表现为DBM逐渐被吸收,代之以纤维结缔组织,没有新生骨组织出现. 结论以hMSCs-CTLA4作为种子细胞构建的组织工程骨异种移植到F344大鼠皮下可以成骨.hCTLA4-Ig基因修饰的人骨髓间充质干细胞(hMSCs)可能作为骨组织工程异基因种子细胞的来源.
목적관찰인세포독성T림파세포상관항원4-면역구단백융합단백(hCTLA4-Ig)기인수식적인골수간충질간세포(hMSCs)작위충자세포이충이식도F344대서체내시부성골,탐색획득골조직공정이기인충자세포적일충방법. 방법응용함유목적기인 hCTLA4-Ig화증강록색형광단백(EGFP)적역전록병독감염제1대hMSCs,응용G418사선출항성세포군(hMSCs-CTLA4);용역전록-취합매련반응(RT-PCR)화면역세포화학방법분별검측hMSCs-CTLA4중hCTLA4-Ig mRNA화단백질표체.용형광격활세포분선의(FACS)검측hMSCs-CTLA4중표체hCTLA4-Ig단백적양성솔.장hMSCs-CTLA4작위충자세포재체외구건조직공정골병이식도F344대서피하,용X선편、조직형태학、면역조직화학방법분별관찰기체내성골상황화hCTLA4-Ig표체정황. 결과분리적hMSCs CD105표체양성,CD34표체음성.hMSCs-CTLA4적세포형태정사형,여hMSCs비교무명현개변;도치형광현미경관찰견절대다수세포정록색,강양성표체EGFP.RT-PCR、면역세포화학결과분별증실hMSCs-CTLA4표체hCTLA4-Ig mRNA화단백.FACS검측결과현시:hMSCs-CTLA4표체hCTLA4-Ig단백적양성솔위78.4%.본실험구건적조직공정골,매극탈개골기질(DBM)상흡부、생장적세포약(1～1.5)×106개.DBM/hMSCs-CTLA4조식입F344대서피하술후2～12주균가검측도hCTLA4-Ig양성표체세포,8～12주출현인원성신생골조직;이단순DBM조여DBM/hMSCs조표현위DBM축점피흡수,대지이섬유결체조직,몰유신생골조직출현. 결론이hMSCs-CTLA4작위충자세포구건적조직공정골이충이식도F344대서피하가이성골.hCTLA4-Ig기인수식적인골수간충질간세포(hMSCs)가능작위골조직공정이기인충자세포적래원.