CAJ | 학술논문

目的以相互作用的几种免疫细胞上共同表达的抗原物质为标志,运用磁珠分选技术,从慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞中同时获得并建立体外多细胞共培养体系,体外观察细胞之间的相互作用.方法采用梯度离心法分离30倒慢性乙肝病毒感染者外周血单个核细胞(PBMC),采用免疫磁珠分选法分离获得CXCR5+细胞,通过流式细胞仪检测CXCR5+细胞纯度和组成,并将CXCR5+细胞进行体外培养.在分离得到的CXCR5+细胞的基础上,将CXCR5+细胞分为3组,分别为对照组:不加任何刺激；实验组一；加入IL-2I刺激培养,实验组二:与人肝癌细胞系(HepG2)2215细胞混合培养.体外培养一周后,流式细胞仪检测实验组与对照组细胞B细胞数量变化,ELISA测定培养体系中上清液HBe抗体的含量.结果 1)用流式细胞仪鉴定CXCR5+细胞的纯度和构成:CXCR5+细胞纯度为85.5±5 8％,其中Tfh细胞占23.8±7.4％,B细胞占35.6±7.6％；2)培养7天后,IL-21刺激组B细胞百分率为47.2±1.8％,与(HepG2)2215混合培养组B细胞百分率为40.2±3.5％,空白对照组B细胞百分率为36.6±7.5％,IL-21刺激组与对照组,(HepG2)2215混合培养组与对照组B细胞百分率均有显著差异(p＜0.05)；3)ELISA检测培养液上清HBeAb定量,IL-21刺激组为0.668±0.094 pg/ml,空白对照组为0.378±0.088 pg/ml,两组有显著差异(p＜0.05).结论使用间接免疫磁珠分离法可成功建立CXCR5+B淋巴细胞和Tfh细胞的共培养体系,为进一步体外研究细胞之间相互关系奠定基础.
목적 이상호작용적궤충면역세포상공동표체적항원물질위표지,운용자주분선기술,종만성을형간염환자외주혈단개핵세포중동시획득병건입체외다세포공배양체계,체외관찰세포지간적상호작용.방법 채용제도리심법분리30도만성을간병독감염자외주혈단개핵세포(PBMC),채용면역자주분선법분리획득CXCR5+세포,통과류식세포의검측CXCR5+세포순도화조성,병장CXCR5+세포진행체외배양.재분리득도적CXCR5+세포적기출상,장CXCR5+세포분위3조,분별위대조조:불가임하자격；실험조일；가입IL-2I자격배양,실험조이:여인간암세포계(HepG2)2215세포혼합배양.체외배양일주후,류식세포의검측실험조여대조조세포B세포수량변화,ELISA측정배양체계중상청액HBe항체적함량.결과 1)용류식세포의감정CXCR5+세포적순도화구성:CXCR5+세포순도위85.5±5 8％,기중Tfh세포점23.8±7.4％,B세포점35.6±7.6％；2)배양7천후,IL-21자격조B세포백분솔위47.2±1.8％,여(HepG2)2215혼합배양조B세포백분솔위40.2±3.5％,공백대조조B세포백분솔위36.6±7.5％,IL-21자격조여대조조,(HepG2)2215혼합배양조여대조조B세포백분솔균유현저차이(p＜0.05)；3)ELISA검측배양액상청HBeAb정량,IL-21자격조위0.668±0.094 pg/ml,공백대조조위0.378±0.088 pg/ml,량조유현저차이(p＜0.05).결론 사용간접면역자주분리법가성공건립CXCR5+B림파세포화Tfh세포적공배양체계,위진일보체외연구세포지간상호관계전정기출.