江苏大学学报（医学版）
江囌大學學報（醫學版）
강소대학학보（의학판）
JOURNAL OF JIANGSU UNIVERSITY (MEDICINE EDITION)
2012年
2期
120-124
,共5页
刘洋%袁利学%步雪峰%严玉兰
劉洋%袁利學%步雪峰%嚴玉蘭
류양%원리학%보설봉%엄옥란
鼠%IFN-λ2%腺病毒载体%构建%鉴定
鼠%IFN-λ2%腺病毒載體%構建%鑒定
서%IFN-λ2%선병독재체%구건%감정
目的:构建鼠IFN-λ2重组腺病毒载体.方法:用人水疱口炎病毒诱导小鼠原代脾细胞表达IFN-λ2,通过RT-PCR 获取IFN-λ2 cDNA,将其亚克隆至pShuttle-CMV载体,经PmeⅠ线性化后,与腺病毒的骨架载体pAdEasy在BJ5183菌中同源重组,转染293A细胞包装扩增,RT-PCR检测重组腺病毒的目的基因,TCID50法对构建的腺病毒进行滴度测定.用鼠IFN-λ2重组腺病毒感染小鼠肺腺癌细胞,蛋白质印迹法检测细胞中IFN-λ2蛋白的表达,倒置显微镜观察鼠IFN-λ2重组腺病毒对鼠肺腺癌细胞生长的抑制作用.结果:成功克隆鼠IFN-λ2的cDNA,序列与基因库公布序列完全一致;经酶切鉴定表明成功构建鼠IFN-λ2重组腺病毒载体;重组腺病毒载体在293A细胞中成功包装及扩增;包装成功的重组腺病毒中含有目的基因,病毒滴度为2×1010pfu/ml;蛋白质印迹显示感染细胞的上清中有鼠IFN-λ2蛋白的表达,倒置显微镜显示感染的鼠肺腺癌细胞生长受到抑制.结论:成功构建了鼠IFN-λ2重组腺病毒载体,并能介导鼠IFN-λ2蛋白的表达进而抑制鼠肺腺癌细胞的生长,为进一步开展抗肿瘤研究及基因治疗奠定基础.
目的:構建鼠IFN-λ2重組腺病毒載體.方法:用人水皰口炎病毒誘導小鼠原代脾細胞錶達IFN-λ2,通過RT-PCR 穫取IFN-λ2 cDNA,將其亞剋隆至pShuttle-CMV載體,經PmeⅠ線性化後,與腺病毒的骨架載體pAdEasy在BJ5183菌中同源重組,轉染293A細胞包裝擴增,RT-PCR檢測重組腺病毒的目的基因,TCID50法對構建的腺病毒進行滴度測定.用鼠IFN-λ2重組腺病毒感染小鼠肺腺癌細胞,蛋白質印跡法檢測細胞中IFN-λ2蛋白的錶達,倒置顯微鏡觀察鼠IFN-λ2重組腺病毒對鼠肺腺癌細胞生長的抑製作用.結果:成功剋隆鼠IFN-λ2的cDNA,序列與基因庫公佈序列完全一緻;經酶切鑒定錶明成功構建鼠IFN-λ2重組腺病毒載體;重組腺病毒載體在293A細胞中成功包裝及擴增;包裝成功的重組腺病毒中含有目的基因,病毒滴度為2×1010pfu/ml;蛋白質印跡顯示感染細胞的上清中有鼠IFN-λ2蛋白的錶達,倒置顯微鏡顯示感染的鼠肺腺癌細胞生長受到抑製.結論:成功構建瞭鼠IFN-λ2重組腺病毒載體,併能介導鼠IFN-λ2蛋白的錶達進而抑製鼠肺腺癌細胞的生長,為進一步開展抗腫瘤研究及基因治療奠定基礎.
목적:구건서IFN-λ2중조선병독재체.방법:용인수포구염병독유도소서원대비세포표체IFN-λ2,통과RT-PCR 획취IFN-λ2 cDNA,장기아극륭지pShuttle-CMV재체,경PmeⅠ선성화후,여선병독적골가재체pAdEasy재BJ5183균중동원중조,전염293A세포포장확증,RT-PCR검측중조선병독적목적기인,TCID50법대구건적선병독진행적도측정.용서IFN-λ2중조선병독감염소서폐선암세포,단백질인적법검측세포중IFN-λ2단백적표체,도치현미경관찰서IFN-λ2중조선병독대서폐선암세포생장적억제작용.결과:성공극륭서IFN-λ2적cDNA,서렬여기인고공포서렬완전일치;경매절감정표명성공구건서IFN-λ2중조선병독재체;중조선병독재체재293A세포중성공포장급확증;포장성공적중조선병독중함유목적기인,병독적도위2×1010pfu/ml;단백질인적현시감염세포적상청중유서IFN-λ2단백적표체,도치현미경현시감염적서폐선암세포생장수도억제.결론:성공구건료서IFN-λ2중조선병독재체,병능개도서IFN-λ2단백적표체진이억제서폐선암세포적생장,위진일보개전항종류연구급기인치료전정기출.
