齐鲁医学杂志
齊魯醫學雜誌
제로의학잡지
MEDICAL JOURNAL OF QILU
2011年
6期
494-496,498
,共4页
王衍刚%窦以河%刘世海%姚如永%隋爱华%刘相萍
王衍剛%竇以河%劉世海%姚如永%隋愛華%劉相萍
왕연강%두이하%류세해%요여영%수애화%류상평
TNF相关凋亡诱导配体%重组腺病毒%聚合酶链反应
TNF相關凋亡誘導配體%重組腺病毒%聚閤酶鏈反應
TNF상관조망유도배체%중조선병독%취합매련반응
目的 构建表达分泌型肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体( TRAIL)基因的重组腺病毒载体.方法 采用PCR技术从人肝脏cDNA文库中扩增出编码114～281位氨基酸的TRAIL基因片段.将扩增的TRAIL插入含有分泌性信号肽IL-2的腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-IL-2中,将其命名为pAdTrack-CMV-IL-2-TRAIL.pAdTrack-CMV-IL-2-TRAIL经Pme Ⅰ线性化后,电转化入转化了pAdEasy-1的BJ5183细胞.筛选重组腺病毒质粒pAd-sTRAIL.经HEK293细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒Ad-sTRAIL,氯化铯密度梯度离心纯化AdsTRAIL病毒,并测定病毒滴度.采用RT-PCR法和免疫荧光技术分别检测目的基因的表达.结果 纯化后的Ad-TRAIL病毒滴度为3.12×1015 pfu/L.经RT-PCR扩增出长104 bp的基因片段.免疫荧光检测到了目的基因在U251细胞的高效表达.结论 成功构建了重组分泌型TRAIL腺病毒载体,为下一步应用于脑肿瘤的基因治疗打下了基础.
目的 構建錶達分泌型腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體( TRAIL)基因的重組腺病毒載體.方法 採用PCR技術從人肝髒cDNA文庫中擴增齣編碼114～281位氨基痠的TRAIL基因片段.將擴增的TRAIL插入含有分泌性信號肽IL-2的腺病毒穿梭質粒pAdTrack-CMV-IL-2中,將其命名為pAdTrack-CMV-IL-2-TRAIL.pAdTrack-CMV-IL-2-TRAIL經Pme Ⅰ線性化後,電轉化入轉化瞭pAdEasy-1的BJ5183細胞.篩選重組腺病毒質粒pAd-sTRAIL.經HEK293細胞包裝後得到複製缺陷型重組腺病毒Ad-sTRAIL,氯化銫密度梯度離心純化AdsTRAIL病毒,併測定病毒滴度.採用RT-PCR法和免疫熒光技術分彆檢測目的基因的錶達.結果 純化後的Ad-TRAIL病毒滴度為3.12×1015 pfu/L.經RT-PCR擴增齣長104 bp的基因片段.免疫熒光檢測到瞭目的基因在U251細胞的高效錶達.結論 成功構建瞭重組分泌型TRAIL腺病毒載體,為下一步應用于腦腫瘤的基因治療打下瞭基礎.
목적 구건표체분비형종류배사인자상관조망유도배체( TRAIL)기인적중조선병독재체.방법 채용PCR기술종인간장cDNA문고중확증출편마114～281위안기산적TRAIL기인편단.장확증적TRAIL삽입함유분비성신호태IL-2적선병독천사질립pAdTrack-CMV-IL-2중,장기명명위pAdTrack-CMV-IL-2-TRAIL.pAdTrack-CMV-IL-2-TRAIL경Pme Ⅰ선성화후,전전화입전화료pAdEasy-1적BJ5183세포.사선중조선병독질립pAd-sTRAIL.경HEK293세포포장후득도복제결함형중조선병독Ad-sTRAIL,록화색밀도제도리심순화AdsTRAIL병독,병측정병독적도.채용RT-PCR법화면역형광기술분별검측목적기인적표체.결과 순화후적Ad-TRAIL병독적도위3.12×1015 pfu/L.경RT-PCR확증출장104 bp적기인편단.면역형광검측도료목적기인재U251세포적고효표체.결론 성공구건료중조분비형TRAIL선병독재체,위하일보응용우뇌종류적기인치료타하료기출.
