中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2011年
3期
80-83
,共4页
王惠娥%孙献莹%高庆华%韩春梅%沈波%武延风
王惠娥%孫獻瑩%高慶華%韓春梅%瀋波%武延風
왕혜아%손헌형%고경화%한춘매%침파%무연풍
奶牛%精子%总RNA%RT-PCR
奶牛%精子%總RNA%RT-PCR
내우%정자%총RNA%RT-PCR
优选3头公牛细管冻精,采用上游法获得纯化精子,以含体细胞污染的精子作对照,应用离心层析柱方法和Trizol一步法相结合提取总RNA,紫外分光光度计检测总RNA的D260/280值和产量,并对总RNA进行RT-PCR和凝胶电泳.结果显示,纯化的牛精子中不含体细胞,奶牛细管精液总RNA在2h内完成提取,D260/280值为1.80,大于200bp的总RNA产量为0.92 μg/10～7个精子,精子总RNA进行RT-PCR,电泳后可得到清晰的SRY、LEY和RYS23基因3条带,不含18S rRNA基因条带.结果表明,离心层析柱法和Trizol一步法相结合可获得高质量的奶牛精子总RNA,且纯度和完整度高,可满足分子生物学研究的要求.
優選3頭公牛細管凍精,採用上遊法穫得純化精子,以含體細胞汙染的精子作對照,應用離心層析柱方法和Trizol一步法相結閤提取總RNA,紫外分光光度計檢測總RNA的D260/280值和產量,併對總RNA進行RT-PCR和凝膠電泳.結果顯示,純化的牛精子中不含體細胞,奶牛細管精液總RNA在2h內完成提取,D260/280值為1.80,大于200bp的總RNA產量為0.92 μg/10～7箇精子,精子總RNA進行RT-PCR,電泳後可得到清晰的SRY、LEY和RYS23基因3條帶,不含18S rRNA基因條帶.結果錶明,離心層析柱法和Trizol一步法相結閤可穫得高質量的奶牛精子總RNA,且純度和完整度高,可滿足分子生物學研究的要求.
우선3두공우세관동정,채용상유법획득순화정자,이함체세포오염적정자작대조,응용리심층석주방법화Trizol일보법상결합제취총RNA,자외분광광도계검측총RNA적D260/280치화산량,병대총RNA진행RT-PCR화응효전영.결과현시,순화적우정자중불함체세포,내우세관정액총RNA재2h내완성제취,D260/280치위1.80,대우200bp적총RNA산량위0.92 μg/10～7개정자,정자총RNA진행RT-PCR,전영후가득도청석적SRY、LEY화RYS23기인3조대,불함18S rRNA기인조대.결과표명,리심층석주법화Trizol일보법상결합가획득고질량적내우정자총RNA,차순도화완정도고,가만족분자생물학연구적요구.
