作物学报
作物學報
작물학보
ACTA AGRONOMICA SINICA
2011年
3期
397-404
,共8页
张艳敏%张红梅%相金英%郭秀林%刘子会%李国良%陈受宜
張豔敏%張紅梅%相金英%郭秀林%劉子會%李國良%陳受宜
장염민%장홍매%상금영%곽수림%류자회%리국량%진수의
转基因苜蓿%BADH%T-DNA%侧翼序列%事件特异性检测
轉基因苜蓿%BADH%T-DNA%側翼序列%事件特異性檢測
전기인목숙%BADH%T-DNA%측익서렬%사건특이성검측
为了从分子水平上鉴别不同的转基因株系,以转BADH基因苜蓿的To代基因组DNA为模板,采用热不对称交错PCR(TAIL-PCR)方法分离其外源基因插入位点的侧翼序列,获得了B127株系的左翼序列和右翼序列,以及B125、B138、B295和B196株系的左翼序列.侧翼序列特征分析表明,有的T-DNA边界序列被删除,有的边界序列被保留,并填充了一段未知来源的核苷酸序列.根据侧翼序列中插入载体序列和紧邻插入序列的基因组序列特征,分别设计PCR扩增的上、下游引物,并对获得的42个转BADH株系分别进行左、右翼序列的扩增,结果表明,转基因植株B106、B125、B138、B157、B158、B289、B295、B305和B127具有相同的扩增条带,B203、B220、B223和B196具有相同的扩增条带,说明这些株系可能仅来源于2个转化事件.本研究建立的事件特异性检测方法可以准确地将不同的转化株系区别开来.
為瞭從分子水平上鑒彆不同的轉基因株繫,以轉BADH基因苜蓿的To代基因組DNA為模闆,採用熱不對稱交錯PCR(TAIL-PCR)方法分離其外源基因插入位點的側翼序列,穫得瞭B127株繫的左翼序列和右翼序列,以及B125、B138、B295和B196株繫的左翼序列.側翼序列特徵分析錶明,有的T-DNA邊界序列被刪除,有的邊界序列被保留,併填充瞭一段未知來源的覈苷痠序列.根據側翼序列中插入載體序列和緊鄰插入序列的基因組序列特徵,分彆設計PCR擴增的上、下遊引物,併對穫得的42箇轉BADH株繫分彆進行左、右翼序列的擴增,結果錶明,轉基因植株B106、B125、B138、B157、B158、B289、B295、B305和B127具有相同的擴增條帶,B203、B220、B223和B196具有相同的擴增條帶,說明這些株繫可能僅來源于2箇轉化事件.本研究建立的事件特異性檢測方法可以準確地將不同的轉化株繫區彆開來.
위료종분자수평상감별불동적전기인주계,이전BADH기인목숙적To대기인조DNA위모판,채용열불대칭교착PCR(TAIL-PCR)방법분리기외원기인삽입위점적측익서렬,획득료B127주계적좌익서렬화우익서렬,이급B125、B138、B295화B196주계적좌익서렬.측익서렬특정분석표명,유적T-DNA변계서렬피산제,유적변계서렬피보류,병전충료일단미지래원적핵감산서렬.근거측익서렬중삽입재체서렬화긴린삽입서렬적기인조서렬특정,분별설계PCR확증적상、하유인물,병대획득적42개전BADH주계분별진행좌、우익서렬적확증,결과표명,전기인식주B106、B125、B138、B157、B158、B289、B295、B305화B127구유상동적확증조대,B203、B220、B223화B196구유상동적확증조대,설명저사주계가능부래원우2개전화사건.본연구건립적사건특이성검측방법가이준학지장불동적전화주계구별개래.
