四川大学学报（医学版）
四川大學學報（醫學版）
사천대학학보（의학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2006年
2期
301-304
,共4页
李甫强%周鸿鹰%羊惠君%项涛%梅妍%胡火珍%王廷华
李甫彊%週鴻鷹%羊惠君%項濤%梅妍%鬍火珍%王廷華
리보강%주홍응%양혜군%항도%매연%호화진%왕정화
差速贴壁法%分离纯化%骨髓间充质干细胞%GFP转基因小鼠
差速貼壁法%分離純化%骨髓間充質榦細胞%GFP轉基因小鼠
차속첩벽법%분리순화%골수간충질간세포%GFP전기인소서
目的运用差速贴壁法分离纯化绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs).方法分离GFP转基因小鼠骨髓细胞直接种植在培养瓶中,分别于2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、14 h、16 h、24 h和48 h进行首次全量换液,培养3 d后按细胞类型对贴壁细胞分别计数,并用CD44、CD45、CD54进行免疫细胞化学染色.另外,选4 h、8 h、24 h后换液的细胞进行传代培养,传至第5代,计算扩增倍数,用CD44、CD45、CD54进行免疫细胞化学染色.结果随着首次换液时间的延长,贴壁细胞密度增多,BMSCs的比例减少.首次换液时间在接种后2 h的细胞纯度高,但细胞密度低;24 h后的细胞密度高而纯度低;8 h后的细胞密度大具有较高的纯度.传代后的GFP转基因小鼠BMSCs能稳定表达GFP.结论差速贴壁法能有效分离纯化GFP转基因小鼠BMSCs,首次换液时间在接种后8～10 h时的传代细胞纯度高,具有扩增能力,可作为组织工程和基因治疗研究的种子细胞.
目的運用差速貼壁法分離純化綠色熒光蛋白(GFP)轉基因小鼠骨髓間充質榦細胞(BMSCs).方法分離GFP轉基因小鼠骨髓細胞直接種植在培養瓶中,分彆于2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、14 h、16 h、24 h和48 h進行首次全量換液,培養3 d後按細胞類型對貼壁細胞分彆計數,併用CD44、CD45、CD54進行免疫細胞化學染色.另外,選4 h、8 h、24 h後換液的細胞進行傳代培養,傳至第5代,計算擴增倍數,用CD44、CD45、CD54進行免疫細胞化學染色.結果隨著首次換液時間的延長,貼壁細胞密度增多,BMSCs的比例減少.首次換液時間在接種後2 h的細胞純度高,但細胞密度低;24 h後的細胞密度高而純度低;8 h後的細胞密度大具有較高的純度.傳代後的GFP轉基因小鼠BMSCs能穩定錶達GFP.結論差速貼壁法能有效分離純化GFP轉基因小鼠BMSCs,首次換液時間在接種後8～10 h時的傳代細胞純度高,具有擴增能力,可作為組織工程和基因治療研究的種子細胞.
목적운용차속첩벽법분리순화록색형광단백(GFP)전기인소서골수간충질간세포(BMSCs).방법분리GFP전기인소서골수세포직접충식재배양병중,분별우2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、14 h、16 h、24 h화48 h진행수차전량환액,배양3 d후안세포류형대첩벽세포분별계수,병용CD44、CD45、CD54진행면역세포화학염색.령외,선4 h、8 h、24 h후환액적세포진행전대배양,전지제5대,계산확증배수,용CD44、CD45、CD54진행면역세포화학염색.결과수착수차환액시간적연장,첩벽세포밀도증다,BMSCs적비례감소.수차환액시간재접충후2 h적세포순도고,단세포밀도저;24 h후적세포밀도고이순도저;8 h후적세포밀도대구유교고적순도.전대후적GFP전기인소서BMSCs능은정표체GFP.결론차속첩벽법능유효분리순화GFP전기인소서BMSCs,수차환액시간재접충후8～10 h시적전대세포순도고,구유확증능력,가작위조직공정화기인치료연구적충자세포.
