基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2006年
2期
149-155
,共7页
潘新%王丽梅%李静%路长林%耿美玉
潘新%王麗梅%李靜%路長林%耿美玉
반신%왕려매%리정%로장림%경미옥
神经细胞黏附因子L1%基因表达%细胞转染%PC12细胞
神經細胞黏附因子L1%基因錶達%細胞轉染%PC12細胞
신경세포점부인자L1%기인표체%세포전염%PC12세포
目的获得重组神经细胞黏附因子L1(L1),研究其结构与功能的关系.方法通过RT-PCR方法,扩增出L1cDNA;构建原核表达pET 28 α+和真核表达pcDNA3.0载体;并构建L1胞外域不同结构基序的原核表达载体;将pETL1s转化大肠杆菌BL21(DE3),获得表达菌株BLL1s;将pcDNA3.0-L1真核表达质粒转染入PC12细胞中,筛选稳定表达L1的基因工程细胞株PC12-L;用原核表达的L1胞外不同结构域蛋白刺激PC12_L1基因工程细胞,观察其分化情况.结果IgI-FN5胞外域、Ig(Ⅰ-Ⅵ)免疫球蛋白样结构域和FN(1-5)纤连蛋白型Ⅲ重复序列均可明显促进PC12-L1细胞突起生长,具有生物学活性;Ig(Ⅴ-Ⅵ)也可促进PC12-L1细胞突起生长,但生物活性显著降低;FN(3-5)不能促进PC12-L1细胞突起生长,没有生物活性.结论L1分子胞外至少有2个结构域Ig(Ⅰ-Ⅵ)和FN(1-5)可显著促进PC12-L1细胞的突起生长,对L1分子生物活性的维持必不可少;胞外免疫球蛋白结构域Ig(Ⅴ-Ⅵ)对维持L1分子的生物活性不十分重要;纤连蛋白型Ⅲ重复序列结构域FN(3-5)对维持L1分子的生物活性不重要.
目的穫得重組神經細胞黏附因子L1(L1),研究其結構與功能的關繫.方法通過RT-PCR方法,擴增齣L1cDNA;構建原覈錶達pET 28 α+和真覈錶達pcDNA3.0載體;併構建L1胞外域不同結構基序的原覈錶達載體;將pETL1s轉化大腸桿菌BL21(DE3),穫得錶達菌株BLL1s;將pcDNA3.0-L1真覈錶達質粒轉染入PC12細胞中,篩選穩定錶達L1的基因工程細胞株PC12-L;用原覈錶達的L1胞外不同結構域蛋白刺激PC12_L1基因工程細胞,觀察其分化情況.結果IgI-FN5胞外域、Ig(Ⅰ-Ⅵ)免疫毬蛋白樣結構域和FN(1-5)纖連蛋白型Ⅲ重複序列均可明顯促進PC12-L1細胞突起生長,具有生物學活性;Ig(Ⅴ-Ⅵ)也可促進PC12-L1細胞突起生長,但生物活性顯著降低;FN(3-5)不能促進PC12-L1細胞突起生長,沒有生物活性.結論L1分子胞外至少有2箇結構域Ig(Ⅰ-Ⅵ)和FN(1-5)可顯著促進PC12-L1細胞的突起生長,對L1分子生物活性的維持必不可少;胞外免疫毬蛋白結構域Ig(Ⅴ-Ⅵ)對維持L1分子的生物活性不十分重要;纖連蛋白型Ⅲ重複序列結構域FN(3-5)對維持L1分子的生物活性不重要.
목적획득중조신경세포점부인자L1(L1),연구기결구여공능적관계.방법통과RT-PCR방법,확증출L1cDNA;구건원핵표체pET 28 α+화진핵표체pcDNA3.0재체;병구건L1포외역불동결구기서적원핵표체재체;장pETL1s전화대장간균BL21(DE3),획득표체균주BLL1s;장pcDNA3.0-L1진핵표체질립전염입PC12세포중,사선은정표체L1적기인공정세포주PC12-L;용원핵표체적L1포외불동결구역단백자격PC12_L1기인공정세포,관찰기분화정황.결과IgI-FN5포외역、Ig(Ⅰ-Ⅵ)면역구단백양결구역화FN(1-5)섬련단백형Ⅲ중복서렬균가명현촉진PC12-L1세포돌기생장,구유생물학활성;Ig(Ⅴ-Ⅵ)야가촉진PC12-L1세포돌기생장,단생물활성현저강저;FN(3-5)불능촉진PC12-L1세포돌기생장,몰유생물활성.결론L1분자포외지소유2개결구역Ig(Ⅰ-Ⅵ)화FN(1-5)가현저촉진PC12-L1세포적돌기생장,대L1분자생물활성적유지필불가소;포외면역구단백결구역Ig(Ⅴ-Ⅵ)대유지L1분자적생물활성불십분중요;섬련단백형Ⅲ중복서렬결구역FN(3-5)대유지L1분자적생물활성불중요.
