四川大学学报(医学版)
四川大學學報(醫學版)
사천대학학보(의학판)
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2009年
4期
679-683
,共5页
成志勇%梁文同%牛志云%薛芳%姚丽%潘崚
成誌勇%樑文同%牛誌雲%薛芳%姚麗%潘崚
성지용%량문동%우지운%설방%요려%반릉
PTEN基因%腺病毒%K562细胞系%Bcl-2%Caspase-3/7%Caspase-9
PTEN基因%腺病毒%K562細胞繫%Bcl-2%Caspase-3/7%Caspase-9
PTEN기인%선병독%K562세포계%Bcl-2%Caspase-3/7%Caspase-9
目的 探讨肿瘤抑制基因PTEN对人慢性粒细胞白血病K562细胞系的增殖、凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2及Caspase-3/7及-9的影响.方法 将携带有野生型PTEN及绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及空载体腺病毒(Ad-GFP)转染人慢性粒细胞白血病K562细胞系.通过MTT检测细胞生长曲线,流式细胞仪分析转染效率、细胞凋亡率和细胞增殖指数,同时观察光镜、电镜下细胞形态,DNA ladder、荧光染色等方法检测细胞凋亡,荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTEN及Bcl-2 mRNA水平变化,Western Blotting检测PTEN及Bcl-2蛋白变化,应用试剂盒检测Caspase-3/7及-9蛋白活性.结果 以感染复数为200的Ad-PTEN-GFP 转染K562细胞后,最大生长抑制率为37.1%,早期和中晚期凋亡率均高于转染Ad-GFP组和未转染组(P<0.05),转染PTEN基因3 d后Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平分别是Ad-GFP组的0.27倍和 0.58倍,Caspase-3/7及-9蛋白活性在转染PTEN基因后3 d内呈时间依赖性升高.结论 过表达PTEN基因可能通过抑制抗凋亡分子Bcl-2表达,增强Caspase-3/7及-9活性从而抑制K562细胞系增殖,促进细胞凋亡.
目的 探討腫瘤抑製基因PTEN對人慢性粒細胞白血病K562細胞繫的增殖、凋亡及對凋亡相關基因Bcl-2及Caspase-3/7及-9的影響.方法 將攜帶有野生型PTEN及綠色熒光蛋白(GFP)的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及空載體腺病毒(Ad-GFP)轉染人慢性粒細胞白血病K562細胞繫.通過MTT檢測細胞生長麯線,流式細胞儀分析轉染效率、細胞凋亡率和細胞增殖指數,同時觀察光鏡、電鏡下細胞形態,DNA ladder、熒光染色等方法檢測細胞凋亡,熒光定量PCR(FQ-PCR)檢測PTEN及Bcl-2 mRNA水平變化,Western Blotting檢測PTEN及Bcl-2蛋白變化,應用試劑盒檢測Caspase-3/7及-9蛋白活性.結果 以感染複數為200的Ad-PTEN-GFP 轉染K562細胞後,最大生長抑製率為37.1%,早期和中晚期凋亡率均高于轉染Ad-GFP組和未轉染組(P<0.05),轉染PTEN基因3 d後Bcl-2 mRNA及蛋白錶達水平分彆是Ad-GFP組的0.27倍和 0.58倍,Caspase-3/7及-9蛋白活性在轉染PTEN基因後3 d內呈時間依賴性升高.結論 過錶達PTEN基因可能通過抑製抗凋亡分子Bcl-2錶達,增彊Caspase-3/7及-9活性從而抑製K562細胞繫增殖,促進細胞凋亡.
목적 탐토종류억제기인PTEN대인만성립세포백혈병K562세포계적증식、조망급대조망상관기인Bcl-2급Caspase-3/7급-9적영향.방법 장휴대유야생형PTEN급록색형광단백(GFP)적선병독(Ad-PTEN-GFP)급공재체선병독(Ad-GFP)전염인만성립세포백혈병K562세포계.통과MTT검측세포생장곡선,류식세포의분석전염효솔、세포조망솔화세포증식지수,동시관찰광경、전경하세포형태,DNA ladder、형광염색등방법검측세포조망,형광정량PCR(FQ-PCR)검측PTEN급Bcl-2 mRNA수평변화,Western Blotting검측PTEN급Bcl-2단백변화,응용시제합검측Caspase-3/7급-9단백활성.결과 이감염복수위200적Ad-PTEN-GFP 전염K562세포후,최대생장억제솔위37.1%,조기화중만기조망솔균고우전염Ad-GFP조화미전염조(P<0.05),전염PTEN기인3 d후Bcl-2 mRNA급단백표체수평분별시Ad-GFP조적0.27배화 0.58배,Caspase-3/7급-9단백활성재전염PTEN기인후3 d내정시간의뢰성승고.결론 과표체PTEN기인가능통과억제항조망분자Bcl-2표체,증강Caspase-3/7급-9활성종이억제K562세포계증식,촉진세포조망.