中国分子心脏病学杂志
中國分子心髒病學雜誌
중국분자심장병학잡지
MOLECULAR CARDIOLOGY OF CHINA
2009年
1期
1-6
,共6页
关爱丽%牛玉宏%张国平%李纪明%马桢%梁艳艳%胡朝辉%邹云增
關愛麗%牛玉宏%張國平%李紀明%馬楨%樑豔豔%鬍朝輝%鄒雲增
관애려%우옥굉%장국평%리기명%마정%량염염%호조휘%추운증
血管紧张素Ⅱ%心肌微血管内皮细胞%ERK%p53%血管形成实验
血管緊張素Ⅱ%心肌微血管內皮細胞%ERK%p53%血管形成實驗
혈관긴장소Ⅱ%심기미혈관내피세포%ERK%p53%혈관형성실험
目的 心肌内血管紧张素系统的激活是心力衰竭发牛发展的重要因素之一,而其具体作用机制尚有许多不明之处.近年来心肌微血管新生障碍在心力衰竭发病中的作用逐渐得到认识.本研究观察了血管紧张素Ⅱ对心肌微血管内皮细胞功能的直接影响,为进一步明确血管紧张素Ⅱ引起心力衰竭的机制提供参考.方法 (1)植块法分离成年Wistar雄性大鼠的心肌微血管内皮细胞,免疫荧光鉴定细胞种类并传代培养;(2)血管紧张素Ⅱ(10-7 -10-6M)干预培养心肌微血管内皮细胞后,分别采用Western blot方法以及PT-PCR的方法,检测不同干预时间点细胞增殖相关蛋白激酶(ERK)的活性变化和细胞死亡相关分子p53的表达变化;(3)血管形成实验检测心肌微血管内皮细胞的功能:血管紧张素Ⅱ干预培养在Matrigel上的微血管内皮细胞后,显微镜下观察形成管腔样结构的能力.结果 (1)植块法培养原代心肌微血管内皮细胞,细胞纯度达95%左右,且具有形成管腔样结构的能力;(2)在血管紧张素Ⅱ干预心肌微血管内皮细胞10分钟时,ERK的磷酸化水平明显升高,与非干预组相比具有统计学差异(P＜0.05);(3)血管紧张素Ⅱ干预心肌微血管内皮细胞30min,虽然与非干预组相比没有统计学差异,但p53 mRNA表达增加;(4)用血管紧张素Ⅱ持续干预18h,心肌微血管内皮细胞形成管腔样结构的数量明显减少,与非干预组相比具有统计学差异(P＜0.01);单纯血管紧张素Ⅱ持续干预18小时组与前处置10分钟后再干预18小时组相比,心肌微血管内皮细胞形成管腔样结构的数鼍明显减少、或基本上不形成管腔样结构,两组相比具有统计学差异(P＜0.05).结论 持续血管紧张素Ⅱ干预明显降低培养心肌微血管内皮细胞形成管腔样结构的完整性及其数量,其机制可能与增加p53的表达有关;短期血管紧张素Ⅱ前处置培养心肌微血管内皮细胞明显改善持续血管紧张素Ⅱ干预后细胞形成管腔样结构能力的下降,其机制可能与短期升高细胞内蛋白激酶ERK的活性进而起到细胞保护作用有关.
目的 心肌內血管緊張素繫統的激活是心力衰竭髮牛髮展的重要因素之一,而其具體作用機製尚有許多不明之處.近年來心肌微血管新生障礙在心力衰竭髮病中的作用逐漸得到認識.本研究觀察瞭血管緊張素Ⅱ對心肌微血管內皮細胞功能的直接影響,為進一步明確血管緊張素Ⅱ引起心力衰竭的機製提供參攷.方法 (1)植塊法分離成年Wistar雄性大鼠的心肌微血管內皮細胞,免疫熒光鑒定細胞種類併傳代培養;(2)血管緊張素Ⅱ(10-7 -10-6M)榦預培養心肌微血管內皮細胞後,分彆採用Western blot方法以及PT-PCR的方法,檢測不同榦預時間點細胞增殖相關蛋白激酶(ERK)的活性變化和細胞死亡相關分子p53的錶達變化;(3)血管形成實驗檢測心肌微血管內皮細胞的功能:血管緊張素Ⅱ榦預培養在Matrigel上的微血管內皮細胞後,顯微鏡下觀察形成管腔樣結構的能力.結果 (1)植塊法培養原代心肌微血管內皮細胞,細胞純度達95%左右,且具有形成管腔樣結構的能力;(2)在血管緊張素Ⅱ榦預心肌微血管內皮細胞10分鐘時,ERK的燐痠化水平明顯升高,與非榦預組相比具有統計學差異(P＜0.05);(3)血管緊張素Ⅱ榦預心肌微血管內皮細胞30min,雖然與非榦預組相比沒有統計學差異,但p53 mRNA錶達增加;(4)用血管緊張素Ⅱ持續榦預18h,心肌微血管內皮細胞形成管腔樣結構的數量明顯減少,與非榦預組相比具有統計學差異(P＜0.01);單純血管緊張素Ⅱ持續榦預18小時組與前處置10分鐘後再榦預18小時組相比,心肌微血管內皮細胞形成管腔樣結構的數鼉明顯減少、或基本上不形成管腔樣結構,兩組相比具有統計學差異(P＜0.05).結論 持續血管緊張素Ⅱ榦預明顯降低培養心肌微血管內皮細胞形成管腔樣結構的完整性及其數量,其機製可能與增加p53的錶達有關;短期血管緊張素Ⅱ前處置培養心肌微血管內皮細胞明顯改善持續血管緊張素Ⅱ榦預後細胞形成管腔樣結構能力的下降,其機製可能與短期升高細胞內蛋白激酶ERK的活性進而起到細胞保護作用有關.
목적 심기내혈관긴장소계통적격활시심력쇠갈발우발전적중요인소지일,이기구체작용궤제상유허다불명지처.근년래심기미혈관신생장애재심력쇠갈발병중적작용축점득도인식.본연구관찰료혈관긴장소Ⅱ대심기미혈관내피세포공능적직접영향,위진일보명학혈관긴장소Ⅱ인기심력쇠갈적궤제제공삼고.방법 (1)식괴법분리성년Wistar웅성대서적심기미혈관내피세포,면역형광감정세포충류병전대배양;(2)혈관긴장소Ⅱ(10-7 -10-6M)간예배양심기미혈관내피세포후,분별채용Western blot방법이급PT-PCR적방법,검측불동간예시간점세포증식상관단백격매(ERK)적활성변화화세포사망상관분자p53적표체변화;(3)혈관형성실험검측심기미혈관내피세포적공능:혈관긴장소Ⅱ간예배양재Matrigel상적미혈관내피세포후,현미경하관찰형성관강양결구적능력.결과 (1)식괴법배양원대심기미혈관내피세포,세포순도체95%좌우,차구유형성관강양결구적능력;(2)재혈관긴장소Ⅱ간예심기미혈관내피세포10분종시,ERK적린산화수평명현승고,여비간예조상비구유통계학차이(P＜0.05);(3)혈관긴장소Ⅱ간예심기미혈관내피세포30min,수연여비간예조상비몰유통계학차이,단p53 mRNA표체증가;(4)용혈관긴장소Ⅱ지속간예18h,심기미혈관내피세포형성관강양결구적수량명현감소,여비간예조상비구유통계학차이(P＜0.01);단순혈관긴장소Ⅱ지속간예18소시조여전처치10분종후재간예18소시조상비,심기미혈관내피세포형성관강양결구적수타명현감소、혹기본상불형성관강양결구,량조상비구유통계학차이(P＜0.05).결론 지속혈관긴장소Ⅱ간예명현강저배양심기미혈관내피세포형성관강양결구적완정성급기수량,기궤제가능여증가p53적표체유관;단기혈관긴장소Ⅱ전처치배양심기미혈관내피세포명현개선지속혈관긴장소Ⅱ간예후세포형성관강양결구능력적하강,기궤제가능여단기승고세포내단백격매ERK적활성진이기도세포보호작용유관.
