中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2008年
12期
1441-1444
,共4页
李玉荣%霍桂桃%周向梅%尹晓敏%赵德明
李玉榮%霍桂桃%週嚮梅%尹曉敏%趙德明
리옥영%곽계도%주향매%윤효민%조덕명
金黄地鼠%朊蛋白基因%克隆%原核表达
金黃地鼠%朊蛋白基因%剋隆%原覈錶達
금황지서%원단백기인%극륭%원핵표체
采用RT-PCR技术从金黄地鼠(Mesocricetus auratus)脑组织获得朊蛋白基因(Prion protein nucleic acid,PRNP)开放阅读框(0pen reading frame,ORF),截去其N端信号肽(66 bp)和C端GPI锚定位点(69 bp)形成朊蛋白编码区PRNPx;将编码区重组于融合表达质粒Pet-DsbA中,并在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中经IPTG诱导表达,并经Western-blot验证.结果表明,金黄地鼠PRNP基因ORF区全长为765 bp,编码254个氨基酸的前体蛋白,核苷酸序列与已发表金黄地鼠序列(M14054)同源性为99.87%,其第116个氨基酸发生了同义突变由GCT变为GcC;朊蛋白在大肠杆菌得到高效表达,产物是相对分子质量为47 000的融合蛋白.
採用RT-PCR技術從金黃地鼠(Mesocricetus auratus)腦組織穫得朊蛋白基因(Prion protein nucleic acid,PRNP)開放閱讀框(0pen reading frame,ORF),截去其N耑信號肽(66 bp)和C耑GPI錨定位點(69 bp)形成朊蛋白編碼區PRNPx;將編碼區重組于融閤錶達質粒Pet-DsbA中,併在大腸桿菌BL21(DE3)plysS中經IPTG誘導錶達,併經Western-blot驗證.結果錶明,金黃地鼠PRNP基因ORF區全長為765 bp,編碼254箇氨基痠的前體蛋白,覈苷痠序列與已髮錶金黃地鼠序列(M14054)同源性為99.87%,其第116箇氨基痠髮生瞭同義突變由GCT變為GcC;朊蛋白在大腸桿菌得到高效錶達,產物是相對分子質量為47 000的融閤蛋白.
채용RT-PCR기술종금황지서(Mesocricetus auratus)뇌조직획득원단백기인(Prion protein nucleic acid,PRNP)개방열독광(0pen reading frame,ORF),절거기N단신호태(66 bp)화C단GPI묘정위점(69 bp)형성원단백편마구PRNPx;장편마구중조우융합표체질립Pet-DsbA중,병재대장간균BL21(DE3)plysS중경IPTG유도표체,병경Western-blot험증.결과표명,금황지서PRNP기인ORF구전장위765 bp,편마254개안기산적전체단백,핵감산서렬여이발표금황지서서렬(M14054)동원성위99.87%,기제116개안기산발생료동의돌변유GCT변위GcC;원단백재대장간균득도고효표체,산물시상대분자질량위47 000적융합단백.
