第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2008年
14期
1312-1315
,共4页
孟凡萍%杨刚毅%李钶%李伶%齐晓亚%刘建雷%李荣
孟凡萍%楊剛毅%李鈳%李伶%齊曉亞%劉建雷%李榮
맹범평%양강의%리아%리령%제효아%류건뢰%리영
RNA干扰%腺病毒载体%脂联素%3T3-L1细胞
RNA榦擾%腺病毒載體%脂聯素%3T3-L1細胞
RNA간우%선병독재체%지련소%3T3-L1세포
目的 构建携带小鼠脂联素(Acrp30)siRNA腺病毒载体,并检测其对小鼠脂肪细胞Acrp30表达的影响.方法 首先用KpnⅠ+NotⅠ双酶切本课题组前期构建的质粒pSilencer1.0-U6-Acrp30-1和pSilencer1.0-U6-Acrp30-3,得到目的 片段U6-Acrp30-1和U6-Acrp30-3,并将目的 片段亚克隆入穿梭质粒pShuttle,用PmeⅠ线性化穿梭质粒pShuttle-U6-Acrp30-1和pShuttle-U6-Acrp30-3,并与pAdeasy-1在BJ5183内同源重组,筛选、鉴定、测序后,在XL10-Gold中扩增重组腺病毒质粒,最后在293细胞内包装扩增为重组腺病毒Ad-Acrp30-1和Ad-Acrp30-3.用此重组腺病毒感染3T3-L1脂肪细胞,用RT-PCR和ELISA检测其Acrp30 mRNA和蛋白表达.结果 设计并构建了小鼠Acrp30 基因特异性siRNA腺病毒载体,该载体感染脂肪细胞后,能显著抑制其Acrp30 mRNA和蛋白表达.结论 构建的Acrp30 基因特异性siRNA腺病毒载体能有效的抑制脂联素基因在3T3-L1脂肪细胞中的表达.
目的 構建攜帶小鼠脂聯素(Acrp30)siRNA腺病毒載體,併檢測其對小鼠脂肪細胞Acrp30錶達的影響.方法 首先用KpnⅠ+NotⅠ雙酶切本課題組前期構建的質粒pSilencer1.0-U6-Acrp30-1和pSilencer1.0-U6-Acrp30-3,得到目的 片段U6-Acrp30-1和U6-Acrp30-3,併將目的 片段亞剋隆入穿梭質粒pShuttle,用PmeⅠ線性化穿梭質粒pShuttle-U6-Acrp30-1和pShuttle-U6-Acrp30-3,併與pAdeasy-1在BJ5183內同源重組,篩選、鑒定、測序後,在XL10-Gold中擴增重組腺病毒質粒,最後在293細胞內包裝擴增為重組腺病毒Ad-Acrp30-1和Ad-Acrp30-3.用此重組腺病毒感染3T3-L1脂肪細胞,用RT-PCR和ELISA檢測其Acrp30 mRNA和蛋白錶達.結果 設計併構建瞭小鼠Acrp30 基因特異性siRNA腺病毒載體,該載體感染脂肪細胞後,能顯著抑製其Acrp30 mRNA和蛋白錶達.結論 構建的Acrp30 基因特異性siRNA腺病毒載體能有效的抑製脂聯素基因在3T3-L1脂肪細胞中的錶達.
목적 구건휴대소서지련소(Acrp30)siRNA선병독재체,병검측기대소서지방세포Acrp30표체적영향.방법 수선용KpnⅠ+NotⅠ쌍매절본과제조전기구건적질립pSilencer1.0-U6-Acrp30-1화pSilencer1.0-U6-Acrp30-3,득도목적 편단U6-Acrp30-1화U6-Acrp30-3,병장목적 편단아극륭입천사질립pShuttle,용PmeⅠ선성화천사질립pShuttle-U6-Acrp30-1화pShuttle-U6-Acrp30-3,병여pAdeasy-1재BJ5183내동원중조,사선、감정、측서후,재XL10-Gold중확증중조선병독질립,최후재293세포내포장확증위중조선병독Ad-Acrp30-1화Ad-Acrp30-3.용차중조선병독감염3T3-L1지방세포,용RT-PCR화ELISA검측기Acrp30 mRNA화단백표체.결과 설계병구건료소서Acrp30 기인특이성siRNA선병독재체,해재체감염지방세포후,능현저억제기Acrp30 mRNA화단백표체.결론 구건적Acrp30 기인특이성siRNA선병독재체능유효적억제지련소기인재3T3-L1지방세포중적표체.
