生物医学工程学杂志
生物醫學工程學雜誌
생물의학공정학잡지
2007年
6期
1334-1337,1342
,共5页
宿文辉%张哲%张杰%于秉治
宿文輝%張哲%張傑%于秉治
숙문휘%장철%장걸%우병치
人睾丸精子结合蛋白%蛋白纯化%蛋白激酶A
人睪汍精子結閤蛋白%蛋白純化%蛋白激酶A
인고환정자결합단백%단백순화%단백격매A
为探讨人睾丸精子结合蛋白(TSBP)在精子获能及顶体反应中可能发挥的作用,检测了TSBP重组蛋白在体外转染细胞系中对蛋白激酶A活性的影响.构建真核表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)B/tsbp,稳定转染HEK293细胞后,蛋白免疫印迹检测到培养细胞中融合蛋白的表达.选择表达量高的细胞克隆,扩增并用金属亲和层析柱(IMAC)从细胞裂解液中纯化融合蛋白His6-TSBP.用放射自显影法检测HEK293细胞中蛋白激酶A(PKA)活性,发现重组质粒转染组PKA活性高于对照组,确定了TSBP对PKA活性的促进作用.
為探討人睪汍精子結閤蛋白(TSBP)在精子穫能及頂體反應中可能髮揮的作用,檢測瞭TSBP重組蛋白在體外轉染細胞繫中對蛋白激酶A活性的影響.構建真覈錶達載體pcDNA3.1/myc-His(-)B/tsbp,穩定轉染HEK293細胞後,蛋白免疫印跡檢測到培養細胞中融閤蛋白的錶達.選擇錶達量高的細胞剋隆,擴增併用金屬親和層析柱(IMAC)從細胞裂解液中純化融閤蛋白His6-TSBP.用放射自顯影法檢測HEK293細胞中蛋白激酶A(PKA)活性,髮現重組質粒轉染組PKA活性高于對照組,確定瞭TSBP對PKA活性的促進作用.
위탐토인고환정자결합단백(TSBP)재정자획능급정체반응중가능발휘적작용,검측료TSBP중조단백재체외전염세포계중대단백격매A활성적영향.구건진핵표체재체pcDNA3.1/myc-His(-)B/tsbp,은정전염HEK293세포후,단백면역인적검측도배양세포중융합단백적표체.선택표체량고적세포극륭,확증병용금속친화층석주(IMAC)종세포렬해액중순화융합단백His6-TSBP.용방사자현영법검측HEK293세포중단백격매A(PKA)활성,발현중조질립전염조PKA활성고우대조조,학정료TSBP대PKA활성적촉진작용.
