华中农业大学学报
華中農業大學學報
화중농업대학학보
JOURNAL OF HUAZHONG AGRICULTURAL UNIVERSITY
2007年
6期
805-808
,共4页
草甘膦N-乙酰转移酶%亲和层析%连续分光光度分析法%酶反应动力学
草甘膦N-乙酰轉移酶%親和層析%連續分光光度分析法%酶反應動力學
초감련N-을선전이매%친화층석%련속분광광도분석법%매반응동역학
草甘膦N-乙酰转移酶(glyphosate N-acetytransferase,GAT)是一种能够通过转乙酰基的反应将草甘膦代谢为低毒物质乙酰草甘膦的酶,在抗除草剂转基因作物中具有潜在的应用价值.通过将地衣芽孢杆菌Bacillus licheni formis(Weigmann)Chester AB 94036中的草甘膦N-乙酰转移酶(glyphosate N-acetyltransferase,GAT)基因克隆到大肠杆菌中,获得含有重组质粒pGEX 6p-1-gat的重组菌株.对重组菌株进行诱导表达,经过GST亲和层析纯化,获得约17 ku的目的蛋白.通过酶标仪和连续分光光度分析法,对GAT蛋白进行了酶反应动力学测定.研究表明GAT的催化常数kcat为6.420 min-1,米氏常数KM为1.62 mmol/L,由此得出其催化效率kcat/KM为5.52 L/(mmol·min).
草甘膦N-乙酰轉移酶(glyphosate N-acetytransferase,GAT)是一種能夠通過轉乙酰基的反應將草甘膦代謝為低毒物質乙酰草甘膦的酶,在抗除草劑轉基因作物中具有潛在的應用價值.通過將地衣芽孢桿菌Bacillus licheni formis(Weigmann)Chester AB 94036中的草甘膦N-乙酰轉移酶(glyphosate N-acetyltransferase,GAT)基因剋隆到大腸桿菌中,穫得含有重組質粒pGEX 6p-1-gat的重組菌株.對重組菌株進行誘導錶達,經過GST親和層析純化,穫得約17 ku的目的蛋白.通過酶標儀和連續分光光度分析法,對GAT蛋白進行瞭酶反應動力學測定.研究錶明GAT的催化常數kcat為6.420 min-1,米氏常數KM為1.62 mmol/L,由此得齣其催化效率kcat/KM為5.52 L/(mmol·min).
초감련N-을선전이매(glyphosate N-acetytransferase,GAT)시일충능구통과전을선기적반응장초감련대사위저독물질을선초감련적매,재항제초제전기인작물중구유잠재적응용개치.통과장지의아포간균Bacillus licheni formis(Weigmann)Chester AB 94036중적초감련N-을선전이매(glyphosate N-acetyltransferase,GAT)기인극륭도대장간균중,획득함유중조질립pGEX 6p-1-gat적중조균주.대중조균주진행유도표체,경과GST친화층석순화,획득약17 ku적목적단백.통과매표의화련속분광광도분석법,대GAT단백진행료매반응동역학측정.연구표명GAT적최화상수kcat위6.420 min-1,미씨상수KM위1.62 mmol/L,유차득출기최화효솔kcat/KM위5.52 L/(mmol·min).
