CAJ | 학술논문

为研究猪细小病毒PPV-SD1分离株的VP2蛋白的结构与功能,自行设计引物,通过PCR扩增的方法,获得VP2全基因,克隆到pMD18-T载体中进行测序,然后亚克隆到pET30a(+)表达载体中,构建并筛选出阳性重组子,标记为pET30a-VP2.将阳性重组质粒转化进RosettaTM宿主菌中,通过改变IPTG浓度、诱导温度和诱导时间,使重组蛋白获得表达,并确定最佳诱导条件为:IPTG终浓度1.0 mmol/L、诱导温度37℃、诱导时间为3～4 h.经SDS-PAGE和Western-blotting分析表明该重组蛋白相对分子量约为68 ku,具有良好的免疫学活性.
위연구저세소병독PPV-SD1분리주적VP2단백적결구여공능,자행설계인물,통과PCR확증적방법,획득VP2전기인,극륭도pMD18-T재체중진행측서,연후아극륭도pET30a(+)표체재체중,구건병사선출양성중조자,표기위pET30a-VP2.장양성중조질립전화진RosettaTM숙주균중,통과개변IPTG농도、유도온도화유도시간,사중조단백획득표체,병학정최가유도조건위:IPTG종농도1.0 mmol/L、유도온도37℃、유도시간위3～4 h.경SDS-PAGE화Western-blotting분석표명해중조단백상대분자량약위68 ku,구유량호적면역학활성.