中华结核和呼吸杂志
中華結覈和呼吸雜誌
중화결핵화호흡잡지
Chinese Journal of Tuberculosis and Respiratory Diseases
2001年
11期
666-670
,共5页
黄桂君%钱桂生%成党校%张桂芝%吴国明
黃桂君%錢桂生%成黨校%張桂芝%吳國明
황계군%전계생%성당교%장계지%오국명
单羧酸转运蛋白基因%反义技术%乳酸%肺肿瘤
單羧痠轉運蛋白基因%反義技術%乳痠%肺腫瘤
단최산전운단백기인%반의기술%유산%폐종류
目的 以反义技术抑制肿瘤细胞的单羧酸转运蛋白基因第一亚型(MCT1)表达,观察其对肿瘤细胞内pH值(pHi)调节、乳酸转运及生长性质的影响.方法 (1)应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从人肺癌细胞系A549中扩增MCT1目的 基因片段,将克隆的基因片段反向插入逆转录病毒载体pLXSN,构建反义表达重组载体pLXSN-MCT1,并对其进行DNA测序验证.(2)通过电穿孔法将pLXSN、重组载体pLXSN-MCT1转染于肺腺癌细胞系A549中,经G418筛选转染细胞阳性克隆.用PCR方法 鉴定pLXSN-MCT1重组载体在基因组的转染整合及表达;以分光光度法测定细胞内pH及乳酸含量变化,并以细胞生长曲线研究细胞的生长情况.结果 (1)对所构建的重组载体进行双酶切电泳分析及DNA序列分析证明反义载体构建成功.(2)与未转染的A549细胞比较,转染MCT1反义表达重组体的细胞pHi降低、乳酸显著升高(P＜0.001);且细胞的生长受到明显抑制.结论 单羧酸转运蛋白MCT1基因在肿瘤细胞pHi调节、乳酸转运及细胞的生长中起着重要的调节作用.
目的 以反義技術抑製腫瘤細胞的單羧痠轉運蛋白基因第一亞型(MCT1)錶達,觀察其對腫瘤細胞內pH值(pHi)調節、乳痠轉運及生長性質的影響.方法 (1)應用逆轉錄-聚閤酶鏈式反應(RT-PCR)從人肺癌細胞繫A549中擴增MCT1目的 基因片段,將剋隆的基因片段反嚮插入逆轉錄病毒載體pLXSN,構建反義錶達重組載體pLXSN-MCT1,併對其進行DNA測序驗證.(2)通過電穿孔法將pLXSN、重組載體pLXSN-MCT1轉染于肺腺癌細胞繫A549中,經G418篩選轉染細胞暘性剋隆.用PCR方法 鑒定pLXSN-MCT1重組載體在基因組的轉染整閤及錶達;以分光光度法測定細胞內pH及乳痠含量變化,併以細胞生長麯線研究細胞的生長情況.結果 (1)對所構建的重組載體進行雙酶切電泳分析及DNA序列分析證明反義載體構建成功.(2)與未轉染的A549細胞比較,轉染MCT1反義錶達重組體的細胞pHi降低、乳痠顯著升高(P＜0.001);且細胞的生長受到明顯抑製.結論 單羧痠轉運蛋白MCT1基因在腫瘤細胞pHi調節、乳痠轉運及細胞的生長中起著重要的調節作用.
목적 이반의기술억제종류세포적단최산전운단백기인제일아형(MCT1)표체,관찰기대종류세포내pH치(pHi)조절、유산전운급생장성질적영향.방법 (1)응용역전록-취합매련식반응(RT-PCR)종인폐암세포계A549중확증MCT1목적 기인편단,장극륭적기인편단반향삽입역전록병독재체pLXSN,구건반의표체중조재체pLXSN-MCT1,병대기진행DNA측서험증.(2)통과전천공법장pLXSN、중조재체pLXSN-MCT1전염우폐선암세포계A549중,경G418사선전염세포양성극륭.용PCR방법 감정pLXSN-MCT1중조재체재기인조적전염정합급표체;이분광광도법측정세포내pH급유산함량변화,병이세포생장곡선연구세포적생장정황.결과 (1)대소구건적중조재체진행쌍매절전영분석급DNA서렬분석증명반의재체구건성공.(2)여미전염적A549세포비교,전염MCT1반의표체중조체적세포pHi강저、유산현저승고(P＜0.001);차세포적생장수도명현억제.결론 단최산전운단백MCT1기인재종류세포pHi조절、유산전운급세포적생장중기착중요적조절작용.
