广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2007年
12期
1905-1907
,共3页
李永伟%朱明芬%郭云蔚%陈伟%凌小强%李刚
李永偉%硃明芬%郭雲蔚%陳偉%凌小彊%李剛
리영위%주명분%곽운위%진위%릉소강%리강
乙型肝炎病毒%Toll样受体3%HepG2细胞株
乙型肝炎病毒%Toll樣受體3%HepG2細胞株
을형간염병독%Toll양수체3%HepG2세포주
目的 乙肝病毒全基因组体外扩增,构建质粒并测序,酶切后瞬时转染HePG2细胞,观察对HBV抗原分泌,病原识别受体Toll样受体3(TLR3)的表达及细胞增殖的影响.方法 长片段PCR法扩增HBV DNA全长,构建pBlueScript-HBV质粒并转化宿主菌,摇菌后提取质粒经测序,用Sap Ⅰ酶切,获得HBV 3.2 kb基因组,采用脂质体瞬时转染HepG2细胞株,IMX检测HBV所分泌抗原,台盼蓝计数检测细胞增殖活性,直接免疫荧光流式细胞术(FCM)检测表达TLR3的阳性细胞百分率,并与空白对照组对比.结果 HBsAg和HBeAg的分泌随着转染HBV DNA量的增加而升高,除4 μg和6 μg组两组间比较的表面抗原外,差异均有显著性(P＜0.05).TLR3在转染后均有上调,除4 μg与6 μg组间比较外,各组间差异有显著性(P＜0.05).台盼蓝拒染法示细胞存活随转染剂量的升高而减少(P＜0.05),但4 μg和6 μg两组间比较差异无显著意义(P＞0.05).而各转染剂量组HBsAg和e抗原的分泌及细胞的存活数均与TLR3的表达呈显著正相关(P＜0.01).结论 本研究初步表明乙肝病毒可能直接引起HepG2细胞TLR3的上调,而且上调可能启动了细胞的凋亡或坏死机制,成为HBV损伤细胞的非免疫细胞介导机制.
目的 乙肝病毒全基因組體外擴增,構建質粒併測序,酶切後瞬時轉染HePG2細胞,觀察對HBV抗原分泌,病原識彆受體Toll樣受體3(TLR3)的錶達及細胞增殖的影響.方法 長片段PCR法擴增HBV DNA全長,構建pBlueScript-HBV質粒併轉化宿主菌,搖菌後提取質粒經測序,用Sap Ⅰ酶切,穫得HBV 3.2 kb基因組,採用脂質體瞬時轉染HepG2細胞株,IMX檢測HBV所分泌抗原,檯盼藍計數檢測細胞增殖活性,直接免疫熒光流式細胞術(FCM)檢測錶達TLR3的暘性細胞百分率,併與空白對照組對比.結果 HBsAg和HBeAg的分泌隨著轉染HBV DNA量的增加而升高,除4 μg和6 μg組兩組間比較的錶麵抗原外,差異均有顯著性(P＜0.05).TLR3在轉染後均有上調,除4 μg與6 μg組間比較外,各組間差異有顯著性(P＜0.05).檯盼藍拒染法示細胞存活隨轉染劑量的升高而減少(P＜0.05),但4 μg和6 μg兩組間比較差異無顯著意義(P＞0.05).而各轉染劑量組HBsAg和e抗原的分泌及細胞的存活數均與TLR3的錶達呈顯著正相關(P＜0.01).結論 本研究初步錶明乙肝病毒可能直接引起HepG2細胞TLR3的上調,而且上調可能啟動瞭細胞的凋亡或壞死機製,成為HBV損傷細胞的非免疫細胞介導機製.
목적 을간병독전기인조체외확증,구건질립병측서,매절후순시전염HePG2세포,관찰대HBV항원분비,병원식별수체Toll양수체3(TLR3)적표체급세포증식적영향.방법 장편단PCR법확증HBV DNA전장,구건pBlueScript-HBV질립병전화숙주균,요균후제취질립경측서,용Sap Ⅰ매절,획득HBV 3.2 kb기인조,채용지질체순시전염HepG2세포주,IMX검측HBV소분비항원,태반람계수검측세포증식활성,직접면역형광류식세포술(FCM)검측표체TLR3적양성세포백분솔,병여공백대조조대비.결과 HBsAg화HBeAg적분비수착전염HBV DNA량적증가이승고,제4 μg화6 μg조량조간비교적표면항원외,차이균유현저성(P＜0.05).TLR3재전염후균유상조,제4 μg여6 μg조간비교외,각조간차이유현저성(P＜0.05).태반람거염법시세포존활수전염제량적승고이감소(P＜0.05),단4 μg화6 μg량조간비교차이무현저의의(P＞0.05).이각전염제량조HBsAg화e항원적분비급세포적존활수균여TLR3적표체정현저정상관(P＜0.01).결론 본연구초보표명을간병독가능직접인기HepG2세포TLR3적상조,이차상조가능계동료세포적조망혹배사궤제,성위HBV손상세포적비면역세포개도궤제.
