四川农业大学学报
四川農業大學學報
사천농업대학학보
JOURNAL OF SICHUAN AGRICULTURAL UNIVERSITY
2007年
3期
262-266
,共5页
杨洲平%黄乾明%刘一江%陈平%杨菲%王晗光
楊洲平%黃乾明%劉一江%陳平%楊菲%王晗光
양주평%황건명%류일강%진평%양비%왕함광
分子克隆%基因表达%PCR%大肠杆菌
分子剋隆%基因錶達%PCR%大腸桿菌
분자극륭%기인표체%PCR%대장간균
以载有银田牌长白苦瓜MAP30基因(YT-MAP30,Genebank accession No: DQ643968)的质粒DNA(pMD-YT-MAP30)为模板,PCR扩增其成熟肽编码区YTm-MAP30,与原核表达载体pET-30a(+)连接构建重组表达质粒pET-YTm-MAP30,酶切和测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3)PlysS感受态细胞,菌落PCR筛选鉴定阳性菌落.30 ℃培养阳性菌落,IPTG诱导表达不同时间,其表达产物用SDS-PAGE检测并进行可溶性分析.DNA测序结果表明重组质粒pET-YTm-MAP30中YTm-MAP30的序列和插入位点正确.SDS-PAGE分析结果显示IPTG诱导4 h后在35 kD处出现一条增加的表达蛋白条带,且以可溶形式表达.为应用原核表达系统生产MAP30蛋白提供了实验依据.
以載有銀田牌長白苦瓜MAP30基因(YT-MAP30,Genebank accession No: DQ643968)的質粒DNA(pMD-YT-MAP30)為模闆,PCR擴增其成熟肽編碼區YTm-MAP30,與原覈錶達載體pET-30a(+)連接構建重組錶達質粒pET-YTm-MAP30,酶切和測序鑒定後轉化大腸桿菌BL21(DE3)PlysS感受態細胞,菌落PCR篩選鑒定暘性菌落.30 ℃培養暘性菌落,IPTG誘導錶達不同時間,其錶達產物用SDS-PAGE檢測併進行可溶性分析.DNA測序結果錶明重組質粒pET-YTm-MAP30中YTm-MAP30的序列和插入位點正確.SDS-PAGE分析結果顯示IPTG誘導4 h後在35 kD處齣現一條增加的錶達蛋白條帶,且以可溶形式錶達.為應用原覈錶達繫統生產MAP30蛋白提供瞭實驗依據.
이재유은전패장백고과MAP30기인(YT-MAP30,Genebank accession No: DQ643968)적질립DNA(pMD-YT-MAP30)위모판,PCR확증기성숙태편마구YTm-MAP30,여원핵표체재체pET-30a(+)련접구건중조표체질립pET-YTm-MAP30,매절화측서감정후전화대장간균BL21(DE3)PlysS감수태세포,균락PCR사선감정양성균락.30 ℃배양양성균락,IPTG유도표체불동시간,기표체산물용SDS-PAGE검측병진행가용성분석.DNA측서결과표명중조질립pET-YTm-MAP30중YTm-MAP30적서렬화삽입위점정학.SDS-PAGE분석결과현시IPTG유도4 h후재35 kD처출현일조증가적표체단백조대,차이가용형식표체.위응용원핵표체계통생산MAP30단백제공료실험의거.
