哈尔滨医科大学学报
哈爾濱醫科大學學報
합이빈의과대학학보
JOURNAL OF HARBIN MEDICAL UNIVERSITY
2007年
4期
303-305
,共3页
李玉雪%王甲业%李庆海%李妍%凌虹
李玉雪%王甲業%李慶海%李妍%凌虹
리옥설%왕갑업%리경해%리연%릉홍
Ⅰ型人类免疫缺陷病毒%gp140%重叠延伸剪接法
Ⅰ型人類免疫缺陷病毒%gp140%重疊延伸剪接法
Ⅰ형인류면역결함병독%gp140%중첩연신전접법
目的 构建Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)ADA株包膜蛋白(gp140)真核表达载体.方法 分别设计包膜蛋白和突变点两端的两对引物,采用重叠延伸剪接法,构建HIV-1ADA株包膜蛋白gp140突变体.获得的PCR产物与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌后筛选阳性克隆进行测序,鉴定正确后经EcoRⅠ和NheⅠ双酶切,与pcDNA6/myc-HisA载体连接,构建包膜蛋白gp140的真核表达载体(pcDNA6-ADAgp140),转化大肠杆菌后筛选阳性克隆,经PCR及酶切进行鉴定.结果 获得HIV-1ADAgp140的PCR产物,构建了其真核表达载体pcDNA6-ADAgp140,经转化和筛选获得了重组菌,经PCR、酶切及基因测序结果显示序列正确,为预期目的片段.结论 成功构建了ADAgp140包膜蛋白的真核表达载体.此结果为深入研究HIV包膜蛋白生物学特性及进行HIV疫苗研究提供了良好的物质基础.
目的 構建Ⅰ型人類免疫缺陷病毒(HIV-1)ADA株包膜蛋白(gp140)真覈錶達載體.方法 分彆設計包膜蛋白和突變點兩耑的兩對引物,採用重疊延伸剪接法,構建HIV-1ADA株包膜蛋白gp140突變體.穫得的PCR產物與pMD18-T載體連接,轉化大腸桿菌後篩選暘性剋隆進行測序,鑒定正確後經EcoRⅠ和NheⅠ雙酶切,與pcDNA6/myc-HisA載體連接,構建包膜蛋白gp140的真覈錶達載體(pcDNA6-ADAgp140),轉化大腸桿菌後篩選暘性剋隆,經PCR及酶切進行鑒定.結果 穫得HIV-1ADAgp140的PCR產物,構建瞭其真覈錶達載體pcDNA6-ADAgp140,經轉化和篩選穫得瞭重組菌,經PCR、酶切及基因測序結果顯示序列正確,為預期目的片段.結論 成功構建瞭ADAgp140包膜蛋白的真覈錶達載體.此結果為深入研究HIV包膜蛋白生物學特性及進行HIV疫苗研究提供瞭良好的物質基礎.
목적 구건Ⅰ형인류면역결함병독(HIV-1)ADA주포막단백(gp140)진핵표체재체.방법 분별설계포막단백화돌변점량단적량대인물,채용중첩연신전접법,구건HIV-1ADA주포막단백gp140돌변체.획득적PCR산물여pMD18-T재체련접,전화대장간균후사선양성극륭진행측서,감정정학후경EcoRⅠ화NheⅠ쌍매절,여pcDNA6/myc-HisA재체련접,구건포막단백gp140적진핵표체재체(pcDNA6-ADAgp140),전화대장간균후사선양성극륭,경PCR급매절진행감정.결과 획득HIV-1ADAgp140적PCR산물,구건료기진핵표체재체pcDNA6-ADAgp140,경전화화사선획득료중조균,경PCR、매절급기인측서결과현시서렬정학,위예기목적편단.결론 성공구건료ADAgp140포막단백적진핵표체재체.차결과위심입연구HIV포막단백생물학특성급진행HIV역묘연구제공료량호적물질기출.
