临床耳鼻咽喉头颈外科杂志
臨床耳鼻嚥喉頭頸外科雜誌
림상이비인후두경외과잡지
JOURNAL OF CLINICAL OTORHINOLARYNGOLOGY HEAD AND NECK SURGERY
2007年
1期
27-31
,共5页
刘俊%孔维佳%张丹%张亚民%刘贞荣
劉俊%孔維佳%張丹%張亞民%劉貞榮
류준%공유가%장단%장아민%류정영
耳蜗%感觉上皮细胞%原代培养%毛细胞
耳蝸%感覺上皮細胞%原代培養%毛細胞
이와%감각상피세포%원대배양%모세포
目的:建立大鼠耳蜗感觉上皮细胞(CSEC)的原代培养体系,为研究毛细胞再生的分子机制提供大量来源一致的细胞.方法:取出生1 d(P1)的大鼠耳蜗感觉上皮(Corti器)作组织块培养,选择性消化抑制成纤维样细胞(FLC)生长;应用有限稀释法纯化CSEC,倒置显微镜下观察CSEC的形态、生长特征;应用细胞角蛋白18、波形蛋白、Brn3.a和Calretinin的免疫细胞化学及透射电镜等进行鉴定.BrdU标记CSEC核DNA观察CSEC有丝分裂活动.结果:培养第2天CSEC从组织块迁移出来,呈扁平、多角形、核大而圆的上皮细胞形态,细胞之间连接紧密,形成单层时呈"铺路石样"外观;FLC呈梭形"鱼群样"包绕CSEC生长,增殖速度快于CSEC.由纯化的CSEC构成的上皮单层可见由成百个CSEC包绕液体形成的dome.CSEC表达毛细胞的特征性标志物,证实培养的CSEC具有毛细胞前体细胞的特征;并通过有丝分裂活动产生新的细胞即毛细胞样细胞.结论:体外培养的CSEC表达毛细胞特征性标志物,具有毛细胞前体细胞的特征.CSEC原代培养体系的建立,为进一步探讨毛细胞再生的分子机制提供了实验条件.
目的:建立大鼠耳蝸感覺上皮細胞(CSEC)的原代培養體繫,為研究毛細胞再生的分子機製提供大量來源一緻的細胞.方法:取齣生1 d(P1)的大鼠耳蝸感覺上皮(Corti器)作組織塊培養,選擇性消化抑製成纖維樣細胞(FLC)生長;應用有限稀釋法純化CSEC,倒置顯微鏡下觀察CSEC的形態、生長特徵;應用細胞角蛋白18、波形蛋白、Brn3.a和Calretinin的免疫細胞化學及透射電鏡等進行鑒定.BrdU標記CSEC覈DNA觀察CSEC有絲分裂活動.結果:培養第2天CSEC從組織塊遷移齣來,呈扁平、多角形、覈大而圓的上皮細胞形態,細胞之間連接緊密,形成單層時呈"鋪路石樣"外觀;FLC呈梭形"魚群樣"包繞CSEC生長,增殖速度快于CSEC.由純化的CSEC構成的上皮單層可見由成百箇CSEC包繞液體形成的dome.CSEC錶達毛細胞的特徵性標誌物,證實培養的CSEC具有毛細胞前體細胞的特徵;併通過有絲分裂活動產生新的細胞即毛細胞樣細胞.結論:體外培養的CSEC錶達毛細胞特徵性標誌物,具有毛細胞前體細胞的特徵.CSEC原代培養體繫的建立,為進一步探討毛細胞再生的分子機製提供瞭實驗條件.
목적:건립대서이와감각상피세포(CSEC)적원대배양체계,위연구모세포재생적분자궤제제공대량래원일치적세포.방법:취출생1 d(P1)적대서이와감각상피(Corti기)작조직괴배양,선택성소화억제성섬유양세포(FLC)생장;응용유한희석법순화CSEC,도치현미경하관찰CSEC적형태、생장특정;응용세포각단백18、파형단백、Brn3.a화Calretinin적면역세포화학급투사전경등진행감정.BrdU표기CSEC핵DNA관찰CSEC유사분렬활동.결과:배양제2천CSEC종조직괴천이출래,정편평、다각형、핵대이원적상피세포형태,세포지간련접긴밀,형성단층시정"포로석양"외관;FLC정사형"어군양"포요CSEC생장,증식속도쾌우CSEC.유순화적CSEC구성적상피단층가견유성백개CSEC포요액체형성적dome.CSEC표체모세포적특정성표지물,증실배양적CSEC구유모세포전체세포적특정;병통과유사분렬활동산생신적세포즉모세포양세포.결론:체외배양적CSEC표체모세포특정성표지물,구유모세포전체세포적특정.CSEC원대배양체계적건립,위진일보탐토모세포재생적분자궤제제공료실험조건.
